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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鵝源性成分(Goose)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99986
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
嗜根考克氏菌轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白BACH2抗體Human GBE1 ELISA Kit小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)免疫試劑盒

大豆慢生根瘤菌炭疽桿菌致死因子LF抗體Human GBP1 ELISA Kit小鼠DAB2互作蛋白(DAB2IP)免疫試劑盒

枝狀枝孢菌蛋白BOC抗體Human GBF1 ELISA Kit小鼠C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒

南印度站游動球菌氨肽酶A抗體Human GAS7 ELISA Kit小鼠C肽(C-Peptide)免疫試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌       素C型腦鈉素/利鈉肽抗體Human GALNT4 ELISA Kit小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒

棉花枯萎Bcl2 beta蛋白抗體Human GALNT9 ELISA Kit小鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)免疫試劑盒

榛色鏈霉菌骨涎蛋白抗體Human GALNT7(N-acetylgalactosaminyltransferase 7) ELISA Kit小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母死亡調(diào)解子抗體Human GAMT ELISA Kit小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)免疫試劑盒

蘇云金芽孢桿菌Apollon凋亡抑制蛋白抗體Human GALNTL2 ELISA Kit小鼠CXC趨化因子配體1(CXCL1)免疫試劑盒

固氮菌表面趨化因子受體6抗體Human GALNTL5 ELISA Kit小鼠CXC趨化因子13(Cxcl13/Blc/Scyb13)免疫試劑盒

緊縮花褶傘β-內(nèi)啡肽/β endorphin抗體Human GAN ELISA Kit小鼠Cramp 免疫試劑盒

束梗鏈格孢骨成型蛋白受體1A抗體Human GAL3ST4 ELISA Kit小鼠c-jun 免疫試劑盒

分枝節(jié)桿菌Bcl-xL蛋白抗體Human GALE ELISA Kit小鼠c-fos 免疫試劑盒

香蕉磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗體Human GALK1(Galactokinase) ELISA Kit小鼠CD8分子(CD8)免疫試劑盒

梭狀芽孢桿菌相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體Human GAPDHS ELISA Kit小鼠CD4分子(CD4)免疫試劑盒

菊異莖點(diǎn)霉紅2,3 - 二磷酸甘油酸合成酶抗體Human GALNT14 ELISA Kit小鼠CD45分子(CD45)免疫試劑盒
鵝源性成分(Goose)PCR檢測試劑盒橘橙鏈霉菌Streptomyces│aurantiacus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)肽2試劑盒羅漢松樹脂酚 ;Matairesinol

鐮孢屬菌種Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品母親DPP同源物4試劑盒定堿;Wtlfordine

利文斯頓島希瓦氏菌Shewanella│livingstonensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶試劑盒蘿卜硫素;Sulforaphane

光滑假絲酵母Candida│glabrata 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9試劑盒內(nèi)酯酮;Triptolide,14

陰溝腸桿菌Enterobacter│cloacae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品膜內(nèi)氨酰氨基肽酶試劑盒路路通酸;Liquidambaric a

雷夫松氏菌Leifsonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>95%,蛋白≤0.1%膜聯(lián)蛋白A2試劑盒利卡靈-B;(-)-Licarin B

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)膜聯(lián)蛋白Ⅶ試劑盒氯化矢車菊素;Cyanidin Chlo

成對桿菌Dyadobacter│alkalitolerans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品膜聯(lián)蛋白Ⅵ試劑盒酪;4-Hydroxyphenethy

蓋孔菌Filoboletus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR膜聯(lián)蛋白Ⅴ試劑盒胡黃連苷III;Picroside II
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。