上海莼試生物技術有限公司
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更新時間:2017-06-08 12:06:04瀏覽次數:352
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細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞(傣族);KM9405
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞來源于一傣族男性的外周血。1994年由昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類 EB病毒轉化的人B淋巴細胞(傣族);KM9405
實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經平衡后離心8分鐘,速度為1000轉/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態,100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態,故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
粒徑: 40-120μm
工作PH值:2-13
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:≤1500
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-25;交聯葡聚糖G-25(粗顆粒)
英文名字:Sephadex G-25
應用:利用分子篩作用,進行緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子;工業脫鹽。
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結構成分:交聯右旋糖酐
粒徑:細顆粒20-80μm,中顆粒50-150μm,粗顆粒100-300μm
工作PH值:2-13
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:1000-5000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-25;交聯葡聚糖G-25(中顆粒)
英文名字:Sephadex G-25
應用:利用分子篩作用,進行緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子;工業脫鹽。
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結構成分:交聯右旋糖酐
粒徑:細顆粒20-80μm,中顆粒50-150μm,粗顆粒100-300μm
工作PH值:2-13
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:1000-5000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-50;交聯葡聚糖G-50(細顆粒)
英文名字:Sephadex G-50
應用:利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結構成分:交聯右旋糖酐
粒徑:細顆粒20-80μm,中顆粒50-150μm,粗顆粒100-300μm
工作PH值:2-10
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:1500-30000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠LH-20
英文名字:Sephadex LH-20
應用:利用分子篩作用,適合用有機溶劑分離嗜脂性分子,可以非常濟地大規模制備各種天然產物;如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親脂型
結構成分:交聯葡聚糖
粒徑: 100-200目
工作PH值:2-11
操作溫度:4-40℃
排阻極限:4~5KD(與所用溶劑有關)
球蛋白分離范圍:100~4000
保存條件:4-25℃
中文名稱:瓊脂糖凝膠2B
英文名字:Sepharose 2B
性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質
結構成分:2%交聯度瓊脂糖