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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-08 11:33:50瀏覽次數(shù):346
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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商,提供表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET的報價,咨詢,稱技術(shù)服務(wù),咨詢選購。
細(xì)胞名稱 表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET
形態(tài)特性 上皮樣;多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞來源于293細(xì)胞,可以表達(dá)SV40T和EBNA1。
培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS
傳代方法 1:6傳代;2天1次
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:12;D16S539:9;D18S51:18;D19S433:18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境:首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境,即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。
2、營養(yǎng)物質(zhì):細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環(huán)境:培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2,O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進行細(xì)胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
胎盤對胎兒的正常發(fā)育起著至關(guān)重要的作用,而良好的胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的形成,是維持正常的前提。作為胎盤血管床的主要構(gòu)成部分之一,胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞參與胎盤血管形成與重塑、調(diào)節(jié)血管舒縮,在維持胎盤血管床的血流穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人胎盤組織。
2)細(xì)胞鑒定:血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(PECAM-1/CD31)或血管假性血友病子(WF)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,多角形細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
羊膜上皮細(xì)胞
細(xì)胞詳述
胎盤是人類期間由胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的器官。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),而雙方保持相當(dāng)?shù)莫毩⑿浴?nbsp;
羊膜是構(gòu)成胎盤的胎兒部分,是胎盤的zui內(nèi)層。羊膜是附著在絨毛膜板表面的半透明膜。羊膜光滑,無血管、神及淋巴,具有一定的彈性。人類羊膜正常厚0.05mm。其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和基質(zhì)層含有大量不同的膠元。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人正常胎盤組織。
2)細(xì)胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)或細(xì)胞角蛋白-19(CK-19)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞
細(xì)胞詳述
絨毛膜是構(gòu)成胎盤的胎兒部分,占胎盤的主要部分。足月胎盤的絨毛滋養(yǎng)層主要由合體滋養(yǎng)細(xì)胞組成,細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞僅散在可見,滋養(yǎng)層的內(nèi)層為基底膜。
滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、功能調(diào)節(jié)失常與多種相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系;絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞是構(gòu)成胎盤屏障的主要組織結(jié)構(gòu),而胎盤是期間具有物質(zhì)交換與代謝,分泌激素和防御等功能的重要器官。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人正常胎盤組織。
2)細(xì)胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)或細(xì)胞角蛋白7(CK-7)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,多角形細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞
細(xì)胞詳述
胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞是一種多能干細(xì)胞,是具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下,它可以分化成多種功能細(xì)胞。在胚胎發(fā)育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復(fù)過程中,MSC是一種重要的參與組織再生的細(xì)胞庫。在組織損傷引起的特殊信號作用下,MSC遷移到受損部位,在局部聚集增殖,依據(jù)不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增,體外倍增能力旺盛,即使擴增1億倍仍能保持其多向分化能力。此,MSC是一種實用的組織修復(fù)種子細(xì)胞。
相較于其他干細(xì)胞,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞具有來源方便,細(xì)胞數(shù)量充足,易于分離、培養(yǎng)、擴增和純化,傳代擴增30多代后仍具有干細(xì)胞特性。胎盤是目前間充質(zhì)干細(xì)胞的來源。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人正常胎盤組織。
2)細(xì)胞鑒定:CD44免疫熒光染色為陽性,CD45免疫熒光染色為陰性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:長梭狀細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞詳述
臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細(xì)血管,與胎盤的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。
由于臍帶是分娩過程中的廢棄物,同時從臍帶中分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞方法相對成熟,使得人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作為工具細(xì)胞,在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究領(lǐng)域中獲得廣泛應(yīng)用。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人臍帶組織。
2)細(xì)胞鑒定:血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(PECAM-1/CD31)或血管假性血友病子(WF)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞詳述