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上海莼試生物技術有限公司
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更新時間:2017-06-08 11:32:12瀏覽次數:327
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公司是*的ATCC細胞供應商,提供穩定表達EBNA1的人胚腎細胞;293E的報價,咨詢,稱技術服務,咨詢選購。
細胞名稱 穩定表達EBNA1的人胚腎細胞;293E
形態特性 上皮樣;多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞來源于293細胞,穩定表達EBNA1。
培養條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS
傳代方法 1:6傳代;2天1次
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:12;D16S539:9;D18S51:18;D19S433:18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19;
同工酶
染色體 14~25,51~64,有微核
使用權限 A類 培養需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環境:首先應保證被培養的細胞處于無菌、無毒的環境,即對培養液和所有的培養用具進行無菌處理。通常還要在培養液中添加一定量的抗生素以防培養過程中的污染。
2、營養物質:細胞體外培養所需營養物質與體內基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細胞體外培養的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數細胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環境:培養所需氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養液的pH。進行細胞培養時,通常采用培養皿或松蓋培養瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養箱中進行培養。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒。
臍帶是分娩過程中的廢棄物,雖然從臍帶中分離人臍動脈內皮細胞方法相對HUEC更困難一些,但臍動脈種流的是靜脈血,使臍動脈內皮細胞作為研究靜脈內皮的工具細胞,在醫學和生物學研究領域中也有廣泛應用。
細胞特性
1)細胞來源于人臍帶組織。
2)細胞鑒定:血小板-內皮細胞粘附分子(PECAM-1/CD31)或血管假性血友病子(WF)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣細胞,貼壁培養。
臍靜脈平滑肌細胞
細胞詳述
臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒。
血管平滑肌是許多重大血管疾病的細胞基礎;血管平滑肌細胞的異常增加的生長潛力在血管疾病發生過程中起決定作用。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物,同時從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細胞方法相對成熟,使得體外培養的臍靜脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。
細胞特性
1)細胞來源于人臍帶組織。
2)細胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:梭形細胞,不規則細胞,貼壁培養。
脂肪間充質干細胞
細胞詳述
脂肪間充質干細胞是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。主要恢復組織細胞的修復功能,促進細胞的再生,恢復年輕面容的同時,身體機能也得到充分改善,有效改善亞健康、早衰等疾病,由內而外真正的有效抵抗衰老。
脂肪間充質干細胞能夠在體外穩定增殖且衰亡率低,同時它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細胞,適宜大規模培養,對機體損傷小等優點,而且其來源廣泛,體內儲備量大,適宜自體移植,逐漸成為近年來新的研究熱點之一。
細胞特性
1)細胞來源于手術取得的正常人脂肪組織。
2)細胞鑒定:CD44免疫熒光染色為陽性,CD45免疫熒光染色為陰性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:成纖維樣細胞,貼壁培養。
韌帶成纖維細胞
細胞詳述
韌帶屬于以彈性纖維為主的致密結締組織。粗大的彈性纖維或平行排列成束,如項韌帶和黃韌帶。韌帶白色帶狀的結締組織,質堅韌,有彈性,能把骨骼連接在一起,并能固定某些臟器如肝、脾、腎等的位置。
韌帶附著于骨骼的可活動部分,但限制其活動范圍以免損傷。當遭受暴力,產生非生理性活動,韌帶被牽拉而超過其耐受力時,即會發生損傷。
細胞特性
1)細胞來源于手術取得的正常人關節韌帶組織。
2)細胞鑒定:纖維連接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(imentin)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:成纖維樣細胞,貼壁培養。
牙齦上皮細胞
細胞介紹
牙齦是防止異物和細菌及其產物侵襲深層牙周組織的重要屏障。牙齦上皮細胞暴露于菌斑生物膜中,除發揮物理屏障作用外還可以發揮積極的先天抗菌作用,如牙齦