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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-08 11:27:46瀏覽次數(shù):358
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細(xì)胞名稱 雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7
形態(tài)特性 圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞株由陳松森教授實驗室建立;雙位點Cys151和Cys183突變的c-Kit基因轉(zhuǎn)染293ET細(xì)胞,篩選獲得。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;IL-3 or rhGM-CSF
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2)細(xì)胞鑒定:波形蛋白(imentin)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
雪旺細(xì)胞
細(xì)胞詳述:
雪旺細(xì)胞沿神元的突起分布,包裹在神纖維上,雪旺細(xì)胞的外表面有基膜,能分泌神營養(yǎng)子,促進(jìn)受損的神元的存活及其軸突的再生,參與周圍神系統(tǒng)中神纖維的構(gòu)成。研究表明,神元延伸時對與其接觸的底物是非常具有選擇性的,而且一旦與雪旺細(xì)胞接觸,神纖維的延伸就會嚴(yán)格限制在Bungner帶內(nèi)。
細(xì)胞特性:
1) 組織來源于實驗動物的正常腦組織。
2) 細(xì)胞鑒定:GFAP免疫熒光染色為陽性。
3) 鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式:長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
星形膠質(zhì)細(xì)胞
細(xì)胞詳述:
星形膠質(zhì)細(xì)胞,是膠質(zhì)細(xì)胞中體積zui大的一種。從胞體發(fā)出許多長而分支的突起,伸展充填在神細(xì)胞的胞體及其突起之間,起支持和分隔神細(xì)胞的作用。
纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞多分布在腦脊髓的皮質(zhì),突起細(xì)長,分支較少,胞質(zhì)中含,多分布在灰質(zhì),細(xì)胞突起粗短,分支多。胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)絲較少,又稱苔狀細(xì)胞。電鏡下星形膠質(zhì)細(xì)胞的胞核有缺失,胞質(zhì)較清亮,游離核糖核蛋白體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均很少,糖原顆粒豐富,有大量的膠質(zhì)絲。纖維形星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起呈長圓柱形,而原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起呈薄片狀,并常包裹著神細(xì)胞及其突觸。星形膠質(zhì)細(xì)胞的腳板與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間相隔一層基板,腳板質(zhì)膜與基板接觸處有半橋粒結(jié)構(gòu)。
細(xì)胞特性:
1) 組織來源于實驗動物的正常腦組織。
2) 細(xì)胞鑒定:神膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。
3) 鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式:星狀細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
NK細(xì)胞
細(xì)胞詳述
自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)是機體重要的免疫細(xì)胞,不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān),而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子,120kDa,NK細(xì)胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性,而HNK-1(CD57)和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。
自然殺傷細(xì)胞刺激子(natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細(xì)胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用, 體外培養(yǎng)時加入上述細(xì)胞子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細(xì)胞的活性有抑制作用。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常外周血組織。
2)細(xì)胞鑒定:CD56和CD16免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:圓形或橢圓形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
內(nèi)皮祖細(xì)胞
細(xì)胞詳述
內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,在生理或病理素刺激下,可從骨髓動員到外周血參與損傷血管的修復(fù)研究顯示,內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用,并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路。
內(nèi)皮祖細(xì)胞具有游走特性,能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞,缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型,不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)。其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常骨髓血組織。
2)細(xì)胞鑒定:CD31和CD34免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。