上海莼試生物技術有限公司
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更新時間:2017-06-06 10:19:18瀏覽次數:338
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公司是*的ATCC細胞供應商,提供人胚肺成纖維細胞;MRC-5的報價,咨詢,稱技術服務,咨詢選購。
細胞名稱 人胚肺成纖維細胞;MRC-5
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織。由 Jacobs JP于1966年建立。
培養條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 PN15
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amelogenin:XY;D8S1179:13;D21S11:31.2;D7S820:10,11;CSF1PO:11,12;D3S1358:15,17;TH01:8;D13S317:11, 14;D16S539:9, 11;D2S1338:20;D19S433:14,15;vWA:15;THOX:8;D18S51:15,21;D5S818:11, 12;FGA:21,23。
同工酶
染色體
使用權限 A類培養需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環境:首先應保證被培養的細胞處于無菌、無毒的環境,即對培養液和所有的培養用具進行無菌處理。通常還要在培養液中添加一定量的抗生素以防培養過程中的污染。
2、營養物質:細胞體外培養所需營養物質與體內基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細胞體外培養的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數細胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環境:培養所需氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養液的pH。進行細胞培養時,通常采用培養皿或松蓋培養瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養箱中進行培養。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
外基質,參與系膜基質及腎小球基底膜的修復與更新,在腎小球生理功能和病理反應中起著重要作用。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常腎組織。
2)細胞鑒定:結蛋白(Desmin)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:長梭形細胞,不規則細胞,貼壁培養。
腎小球內皮細胞
細胞詳述
腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢。在腎小球內,微血管受到高壓,而加速了超濾作用的進行。腎小球過濾膜從內到外有三層:內層、中層和外層。其中,內層為內皮細胞層,附著在腎小球基底膜內。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常腎組織。
2)細胞鑒定:Ⅷ子相關抗原(Factor Ⅷ)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:圓形,多角形細胞,貼壁培養。
腎小球足細胞
細胞詳述
腎小球為血液過濾器,腎小球毛細血管壁構成過濾膜。腎小球過濾膜從內到外有三層結構:內層為內皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細胞層,上皮細胞又稱足細胞,其不規則突起稱足突,其間有許多狹小間隙,血液濾膜過濾后,濾液入腎小球囊。在正常情況下,血液中絕大部分蛋白質不能濾過而保留于血液中,僅小分子物質如尿素、葡萄糖、電解質及某些小分子蛋白能濾過。
腎足細胞即腎小球上皮細胞,它附著于腎小球基底膜的外側,連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞,體外培養的原代細胞不能增殖。
足細胞呈星型多突狀,胞體較大,由胞體伸出許多突起,呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面,并通過黏附分子和蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連。足細胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜的主要組成成分I型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質金屬蛋白酶和組織蛋白酶,從而在腎小球基底膜的代謝平衡中發揮重要作用。
細胞特性
1)細胞來源于實驗動物正常腎臟組織。
2)細胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)或WT-1(Wilm'sTumorProtein)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:不規則,含足突細胞,貼壁培養。
輸尿管上皮細胞
細胞詳述
輸尿管位于腹膜后,為一肌肉粘膜所組成管狀結構,上起自腎盂,下終止于膀胱三角。輸尿管管壁分為4層:黏膜表面、固有層、輸尿管肌層和外膜。其中,黏膜表面為移行上皮。尿路上皮的研究是泌尿外科領域研究的熱門,其中有尿路上皮腫瘤研究、輸尿管損傷研究等。此,體外培養輸尿管上皮細胞是輸尿管生物學研究的基礎和前提。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常輸尿管組織。
2)細胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:鋪路石狀細胞,不規則細胞,貼壁培養。
輸尿管平滑肌細胞
細胞詳述
輸尿管位于腹膜后,為一肌肉粘膜所組成管狀結構,上起自腎盂,下終止于膀胱三角。輸尿管管壁分為4層:黏膜表面、固有層、輸尿管肌層和外膜。其中,肌層主要由內縱和外環兩層平滑肌組成。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常輸尿管組織。
2)細胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:長梭形細胞,不規則細胞,貼壁培養。
膀胱上皮細胞
細胞詳述
膀胱壁由三層組織組成,由內外為粘膜層、肌層和外膜。其中,粘膜層為極薄的一層移行上皮組織,和輸尿管及尿道黏膜彼此連貫。體外培養膀胱上皮細胞不僅為組織工程膀胱,尿道提供種植細胞的必要手段,也是研究移行上皮細胞腫瘤發生和治療的基礎與前提。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常膀胱組織。
2)細胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:鋪路石狀細胞,不規則細胞,貼壁培養。