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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供人正常眼瞼上皮細(xì)胞；HNEEC/HL-015 的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細(xì)胞名稱  人正常眼瞼上皮細(xì)胞；HNEEC/HL-015  
形態(tài)特性   上皮樣  
生長特性  貼壁生長  
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。   
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　  
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次  
傳代情況  C5  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　  
支原體檢測  陰性　  
STR    
同工酶    
染色體    
使用權(quán)限  未定培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的主要功能是分泌大量膽汁。同時(shí)，肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞通過控制激素調(diào)控的分泌和吸收，在保持、調(diào)整和擴(kuò)大膽小管道結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的病變主要引起膽管炎、膽管結(jié)石甚至膽管癌。  
細(xì)胞特性  
1）來源：1-3天SD大鼠肝臟組織  
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
膽管，輸送膽汁的管道。由肝分泌的膽汁，肝左、右管、肝總管、膽囊管進(jìn)入膽囊貯存，肝內(nèi)膽管的部分包括：左、右肝管；左內(nèi)葉、左外葉、右前葉、右后葉膽管；各肝段膽管；小葉間膽管；毛細(xì)膽管。  
常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]塞、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等，都是以膽管上皮為病變靶位，此研究膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和病理變化有重要意義。在這些病變過程中，肝內(nèi)膽管上皮常暴露于常暴露于較高炎癥子中，會表現(xiàn)細(xì)胞損傷和繼發(fā)性增值為特征的病理變化。  
細(xì)胞特性  
1)細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動物正常肝臟組織。  
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
肝外膽管上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
肝外膽管由左右肝管、肝總管、膽總管組成。肝內(nèi)膽管多級匯合形成左、右肝管，左、右肝管出肝后，在肝門部匯合形成肝總管。 肝總管與膽囊管匯合形成膽總管。肝外膽管上皮細(xì)胞通過控制激素調(diào)控的分泌 和吸收，在保持、調(diào)整和擴(kuò)大膽小管道結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用。肝外膽管上皮細(xì)胞的病變主要引起膽管炎、膽管結(jié)石。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常膽管組織。  
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
隨著人們生活水平的提高，飲食習(xí)慣的改變，腫瘤發(fā)病率也在不斷的增加，如肝癌、胃癌和大腸癌等明顯增加的趨勢。肝臟作為人體重要的器官，在整個(gè)物質(zhì)代謝過程中具有廣泛而多樣的功能。肝臟也是體內(nèi)藥物代謝的重要器官，體內(nèi)復(fù)雜的環(huán)境對藥物代謝等的影響是不言而喻的。但是在體研究藥物或其它化學(xué)物質(zhì)在肝細(xì)胞代謝的分子機(jī)制有一定的困難，此我們建立體外的原代肝細(xì)胞培養(yǎng)模型用于肝細(xì)胞分子生物學(xué)特征的研究，作為對在體肝臟研究模型的有益補(bǔ)充。采用改良的灌流方法將肝臟中的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離、純化、體外培養(yǎng)，全面分析原代肝細(xì)胞的生長和功能狀態(tài)，為肝細(xì)胞分子生物學(xué)特征的研究以及新藥對肝臟的作用機(jī)制的研究提供更有價(jià)值的線索，以更好的解釋藥物作用的機(jī)制。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常肝組織。  
2)細(xì)胞鑒定：葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase)化學(xué)染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
肝星狀細(xì)胞  
細(xì)胞介紹  
肝星狀細(xì)胞（HSC)位于Disse間隙內(nèi)，緊貼著肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞。其形態(tài)不規(guī)則，胞體呈圓形或不規(guī)則形，常伸出數(shù)個(gè)星狀胞突包繞著肝血竇。此外，HSC還伸出胞突與肝細(xì)胞、鄰近的星狀細(xì)胞相接觸。HSC是ECM的主要來源， HSC激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞(MFC)，各種致纖維化素均把HSC作為zui終靶細(xì)胞。肝星狀細(xì)胞激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞(MFC)，各種致纖維化素均把HSC作為zui終靶細(xì)胞，正常情況下肝星狀細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)肝臟受到炎癥或機(jī)械刺激等損傷時(shí)，肝星狀細(xì)胞被激活，其表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚?。激活的肝星狀?xì)胞一方面通過增生和分泌細(xì)胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成和肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建，另一方面通過細(xì)胞收縮使肝竇內(nèi)壓升高。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常肝組織。  
2)細(xì)胞鑒定：結(jié)蛋白（Desmin)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞是肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞中數(shù)目zui多的細(xì)胞，約占肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞總數(shù)的70%，在表型、功能上與普通毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有較大差異。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞之間缺乏細(xì)胞間連接，細(xì)胞下基底膜物質(zhì)很少，此竇內(nèi)皮通透性較高，有利于調(diào)節(jié)物質(zhì)交換。  
不同于肝細(xì)胞的自我復(fù)制，肝再生時(shí)新生LSECs主要來自肝內(nèi)外其他細(xì)胞成分的分化替代，不少研究證實(shí)了肝再生時(shí)LSECs的骨髓源性替代。內(nèi)皮祖細(xì)胞是參與這一過程的主要細(xì)胞成分。  
窗孔是肝竇內(nèi)皮細(xì)胞特征性的結(jié)構(gòu)，從＜10nm至1～2μm不等，生理?xiàng)l件下由于窗孔結(jié)構(gòu)的存在和缺乏內(nèi)皮下完整基膜的結(jié)構(gòu)，由肝竇內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的肝竇壁是全身毛細(xì)血管壁中*缺乏基膜的毛細(xì)血管，除竇內(nèi)的血細(xì)胞外，血漿成分均能從窗孔進(jìn)入Disse間隙，進(jìn)行物質(zhì)交換。  
細(xì)胞特性