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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供大額牛肺細(xì)胞；BFR-L1的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細(xì)胞名稱     大額牛肺細(xì)胞；BFR-L1        
形態(tài)特性      成纖維細(xì)胞樣        
生長特性     貼壁生長        
特征特性      該細(xì)胞系來源于一雄性新生大額牛的肺組織。2000年由昆明細(xì)胞庫建立。         
培養(yǎng)條件      M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  胎牛血清 15%        
傳代方法      1：2傳代；3-4天一次        
傳代情況     P3        
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS         
支原體檢測     熒光法（-）         
STR      -        
同工酶             
染色體             
使用權(quán)限     B類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。

SPP1     cDNA    Mouse    小鼠 SPP1 基因全長ORF克隆
PGLYRP1     cDNA    Mouse    小鼠 Pglyrp1 / PGRP 基因全長ORF克隆
IL1A     cDNA    Mouse    小鼠 IL1F1 / IL1α 基因全長ORF克隆
APCS     cDNA    Mouse    小鼠 APCS / SAP 基因全長ORF克隆
OSM     cDNA    Mouse    小鼠 OSM 基因全長ORF克隆
NRTN     cDNA    Mouse    小鼠 NRTN 基因全長ORF克隆
CD27     cDNA    Mouse    小鼠 CD27 / TNFRSF7 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
CCL25     cDNA    Mouse    小鼠 CCL25 基因全長ORF克隆
IL17D     cDNA    Mouse    小鼠 IL17D 基因全長ORF克隆
CCL28     cDNA    Mouse    小鼠 CCL28 基因全長ORF克隆
RTN4R     cDNA    Mouse    小鼠 RTN4R / NOGOR 基因全長ORF克隆
NDP     cDNA    Mouse    小鼠 NDP / EVR2 基因全長ORF克隆
CCL24     cDNA    Mouse    小鼠 CCL24 基因全長ORF克隆
CD28     cDNA    Mouse    小鼠 CD28 基因全長ORF克隆
IL22RA2     cDNA    Mouse    小鼠 IL22RA2 基因全長ORF克隆
IL1B     cDNA    Mouse    小鼠 IL1F2 / IL1B 基因全長ORF克隆
LGALS1     cDNA    Mouse    小鼠 LGALS1 基因全長ORF克隆
IL12RB2     cDNA    Mouse    小鼠 IL12RB2 基因全長ORF克隆
ITGB6     cDNA    Mouse    小鼠 Integrin beta6 基因全長ORF克隆
IL36A     cDNA    Mouse    小鼠 IL36A / IL1F6 基因全長ORF克隆
IL18R1     cDNA    Mouse    小鼠 IL18R1 基因全長ORF克隆
AHSG     cDNA    Mouse    小鼠 FetuinA / AHSG 基因全長ORF克隆
FZD1     cDNA    Mouse    小鼠 FZD1 基因全長ORF克隆
IL15     cDNA    Mouse    小鼠 IL15 基因全長ORF克隆
IL7R     cDNA    Mouse    小鼠 IL7R 基因全長ORF克隆
CTSZ     cDNA    Mouse    小鼠 CTSZ / CTSX 基因全長ORF克隆
IL13RA1     cDNA    Mouse    小鼠 IL13RA1 基因全長ORF克隆
IL2RG     cDNA    Mouse    小鼠 IL2RG 基因全長ORF克隆
FCGR1     cDNA    Mouse    小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長ORF克隆
COLEC12     cDNA    Mouse    小鼠 COLEC12 基因全長ORF克隆
CTSB     cDNA    Mouse    小鼠 CTSB 基因全長ORF克隆
ASGR1     cDNA    Mouse    小鼠 ASGR1 基因全長ORF克隆
ENPEP     cDNA    Mouse    小鼠 CD249 / ENPEP 基因全長ORF克隆
ITGB3     cDNA    Mouse    小鼠 ITGB3 基因全長ORF克隆
CCL4     cDNA    Mouse    小鼠 CCL4 基因全長ORF克隆
BMPR1A     cDNA    Mouse    小鼠 ALK-3 / BMPRIA 基因全長ORF克隆
FRZB     cDNA    Mouse    小鼠 FRZB / FIZ 基因全長ORF克隆
IL11RA     cDNA    Mouse    小鼠 IL11RA1 基因全長ORF克隆
CD200     cDNA    Mouse    小鼠 CD200 基因全長ORF克隆
IL18     cDNA    Mouse    小鼠 IL18 基因全長ORF克隆
IL17C     cDNA    Mouse    小鼠 IL17C 基因全長ORF克隆
CXCL2     cDNA    Mouse    小鼠 CXCL2 / MIP-2 基因全長ORF克隆
MBL1     cDNA    Mouse    小鼠 MBL1 基因全長ORF克隆