上海莼試生物技術有限公司
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更新時間:2017-05-22 13:34:28瀏覽次數:409
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咨詢購買CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑(),請致電上海莼試生物技術有限公司,為您提供zui全面周到的產品服務,除此之外,我公司*以下產品:
中文名稱:CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑()
英文名字:Cell counting KIT-8 (CCK-8) kit
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明:
一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時)
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。
2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。
3、接種后培養至細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要*,便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間。)
CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑()二、細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在37℃,5% CO2的條件下)。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。
三、細胞增值-毒性檢測
1、在96孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37 ℃,5% CO2的條件下)。
2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。
4、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
5、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。
活力計算:.
細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0加藥)-A(空白)]×100
A(加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0 加藥):具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑()注意事項:
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。
②白細胞可能需要培養較長時間。
③當使用標準96 孔板時,貼壁細胞的zui小接種量至少為1 ,000個/孔 (100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm檢測靈敏度zui高。
⑤培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。
注意事項
1、 TTC 溶液若變成紅色則不可再用。
2、 顯色時要使種子全部浸入 TTC 染色液中。
3、 TCC 染色后應立即觀察,不可久放。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作安全。
1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入),混勻,置于2-8℃保存。
2、*次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。
3. 使用前請先檢查溶液P2、P3和P4是否出現混濁,如有混濁現象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。
4. 洗脫緩沖液體積不應少于50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率。 DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。
5. 質粒DNA濃度>1mg/ml時清除內毒素效率降低。由于質粒DNA本身的性質,清除過程可導致部分質粒DNA丟失,但內毒素卻能得到zui大限度清除。
6. 所有溶液應用無內毒素的高純水配制,所有器械材料均應不含內毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發性水溶液可高壓處理。
7. DNA濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。
(變性)
POSTN Others Human 人 OSF2 / POSTN 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
FGFR4 Others Mouse 小鼠 FGFR4 / CD334 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL13RA2 Others Mouse 小鼠 IL13RA2 / CD213A2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SLAMF1 Others Human 人 CD150 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
KIRREL Others Mouse 小鼠 KIRREL1 / NEPH1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LAMP3 Others Human 人 CD208 / LAMP3 / DC-LAMP 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
P4HB Others Human 人 P4HB / ERBA2L 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TGFBI Others Human 人 BIGH3 / BIG-H3 / TGFBI 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
FIGF Others Human 人 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VEGFC Others Human 人 VEGF-C 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TNFRSF8 Others Human 人 CD30 / TNFRSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TFPI2 Others Human 人 TFPI2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TCN2 Others Human 人 TCN2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SIGIRR Others Mouse 小鼠 SIGIRR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PDCD1 Others Mouse 小鼠 PD1 / PDCD1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PCSK9 Others Rhesus 恒河猴 PCSK9 / NARC1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑()MBL1 Others Mouse 小鼠 MBL1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ERAP2 Others Human 人 LRAP / ERAP2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LIFR Others Human 人 LIFR / CD118 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LEFTY2 Others Human 人 Lefty A 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LDLR Others Human 人 LDLR / LDL Receptor 人細胞裂解液 (陽