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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：z豬胸膜肺炎防線桿菌（APP）PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100173
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：恒溫?zé)晒夥?/font>
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Burkholderia metallica Vanlaere et al.促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子抗體Human S100A10(Protein S100-A10) ELISA Kit人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)免疫試劑盒

泡盛曲霉5號(hào)染色體開放閱讀框54抗體Human PRNP(Major prion protein) ELISA Kit人抗外切酶體復(fù)合物成分RRP45(EXOSC9)抗體免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌CD93抗體Human EGFL7(Epidermal growth factor-like protein 7) ELISA Kit人抗外切酶體成分10(EXOSC10)抗體免疫試劑盒

假單胞菌嗜酸粒趨化蛋白CCL6抗體Human STAT5B(Signal transducer and activator of transcription 5B) ELISA Kit人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)免疫試劑盒

大莖點(diǎn)菌6號(hào)染色體開放閱讀框81抗體Human EBI3(Interleukin-27 subunit beta) ELISA Kit人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)免疫試劑盒

仁果叢梗孢巨噬炎性蛋白1β抗體Human LILRA2(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily A member 2) ELISA Kit人抗突觸前膜抗體(PsmAb)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌NK抑制性受體2DL4抗體Human EGFL7(Epidermal growth factor-like protein 7) ELISA Kit人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(anti-MCV Ab)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌NK抑制性受體2DS4抗體Human LILRB1(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1) ELISA Kit人抗透明帶抗體(aZP)免疫試劑盒

橄欖色盤多毛孢NK抑制性受體3DL1抗體Human ATP2A3(Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 3) ELISA Kit人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)免疫試劑盒

黑曲霉7號(hào)染色體開放閱讀框46抗體Human ECE1(Endothelin-converting enzyme 1) ELISA Kit人抗糖蛋白抗體(GP)免疫試劑盒

白地霉蛋白磷酸酶PP2A癌抑制蛋白抗體Human NDNF(Protein NDNF) ELISA Kit人抗肽酰基脫亞酶4型(PADI4)抗體 免疫試劑盒

岸海桿狀菌巨噬甘露糖受體CD206抗體Human IFNA14(Interferon alpha-14) ELISA Kit人抗髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒

淋巴衍生C-型凝集素抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit人抗髓磷脂相關(guān)糖蛋白(MAG)抗體免疫試劑盒

腸桿菌屬5號(hào)染色體開放閱讀框60抗體Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) ELISA Kit人抗髓磷脂抗體IgA(anti-myelin Ab)免疫試劑盒

霍氏腸桿菌CD44V5抗體Human PLA2G2A(Phospholipase A2, membrane associated) ELISA Kit人抗蘇氨酰基tRNA合成酶,線粒體(TARS2)抗體免疫試劑盒

尖孢鐮刀菌22號(hào)染色體開放閱讀框23抗體Human TNFRSF10B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B) ELISA Kit人抗蘇氨酰基tRNA合成酶,質(zhì)(TARS)抗體免疫試劑盒
z豬胸膜肺炎防線桿菌（APP）PCR檢測(cè)試劑盒: 擬諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR促胰液素/胰泌素試劑盒Alvocidib

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑促胰液素/分泌素受體試劑盒紫杉C

華根霉Rhizopus│chinensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR釋放激素試劑盒育亨賓堿

美麗鹽單胞菌Halomonas│venusta 質(zhì)量規(guī)格：>98%促酰化蛋白試劑盒異三尖杉寧堿

蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR促胃液素受體試劑盒乙酰

迪茨氏菌（加詞待譯）Dietzia│aerolata 質(zhì)量規(guī)格：M.W:10000促睡眠肽試劑盒巖藻黃質(zhì)

新薩托菌屬Neosartorya│sp. 質(zhì)量規(guī)格：AR促生長(zhǎng)激素釋放激素試劑盒新魯斯可皂苷元