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細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
公司產品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：

英文簡稱：MPP 89細胞    

產品名稱：間皮瘤細胞

規格：T25

形態特性：

生長特性：

特征特性：

培養條件：

傳代方法：

貨號：CS-X64082

細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

注意事項：
（1）凍存前細胞狀態，細胞在對數生，細胞密度適合，剛剛發生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節約處就節約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關于“慢凍"，傳統的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室，使用程序降溫盒，內裝異丙醇，在-80度并內可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
埃博霉素B；帕土匹龍英文名稱： Amikacin Sulfate CERD4蛋白抗體包裝250mg

埃博霉素C英文名稱： Amikacin Sulfate CES1P1蛋白抗體包裝5MG

埃博霉素D英文名稱： Amphotericin B羧酸酯酶2抗體包裝1g

埃羅替尼英文名稱： Amphotericin B羧酸酯酶3抗體包裝5g

艾力替尼磺酸鹽(AST1306)英文名稱： Angiotensin Acetate羧酸酯酶4A抗體包裝25g

（三）英文名稱： Anastrozole羧酸酯酶6抗體包裝100g

英文名稱： AnastrozoleCezanne蛋白抗體包裝25g

奧拉帕尼英文名稱： Apramycin sulfate內臟移位線管蛋白CFC1蛋白抗體包裝5g

英文名稱： Apramycin sulfate補體因子H相關蛋白2抗體包裝10ml

巴卡丁 III英文名稱： Arbidol HCl補體因子H相關蛋白4抗體包裝1g

白藜蘆英文名稱： Arbidol HCl補體因子H相關蛋白5抗體包裝25g

英文名稱： Argatroban7號染色體開放閱讀框28A抗體包裝5g

蓓薩羅丁;貝沙羅汀英文名稱： ArgatrobanCpG結合蛋白抗體包裝1g

苯丁酸氮芥英文名稱： Argipressin AcetateCGG結合蛋白1抗體包裝25g

苯酰基十字孢堿(PKC-412)英文名稱： AtenololcGMP依賴性蛋白激酶2抗體包裝5g
MPP 89細胞膽維丁（標準品）英文名稱： Cetirizine 2HCl磷酸化表面趨化因子受體4抗體包裝25g

（標準品）英文名稱： Cetrorelix Acetate磷酸化表面趨化因子受體2抗體包裝5g

地（標準品）英文名稱： Chelerythrine中心體蛋白104抗體包裝100mg

地喹銨（標準品）英文名稱： Chlorhexidine Acatate/乙磷酸轉移酶1抗體包裝1g

地拉羅司(標準品)英文名稱： Fluvastatin sodium salt6號染色體開放閱讀框163抗體包裝500mg

地雷他定（標準品）英文名稱： Fluvastatin sodium salt6號染色體開放閱讀框165抗體包裝1g

磷酸酯（標準品）英文名稱： Clinafloxacin6號染色體開放閱讀框168抗體包裝250mg

/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷（標準品）英文名稱： Levamisole HCl6號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g

海（標準品）英文名稱： Levamisole HCl6號染色體開放閱讀框182抗體包裝1g

海雜質Ⅰ（標準品）英文名稱： Clomipramine HCL 6號染色體開放閱讀框186抗體包裝5g

海雜質Ⅱ（標準品）英文名稱： Clomipramine HCL 6號染色體開放閱讀框191抗體包裝10g

海雜質Ⅲ（標準品）英文名稱： Clopidogrel Bisulfate6號染色體開放閱讀框195抗體包裝1g

化（標準品）英文名稱： Clopidogrel Bisulfate6號染色體開放閱讀框199抗體包裝5g

帕(標準品)英文名稱： Clopidogrel Bisulfate7號染色體開放閱讀框34抗體包裝1g

普羅（標準品）英文名稱： Nabumetone6號染色體開放閱讀框201抗體包裝100g