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玻璃纖維濾膜

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whatman 沃特曼 4057-200 DEAE纖維素填料 DE-52 2kg

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產品型號

品       牌WHATMAN

廠商性質代理商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-07-13 10:43:04瀏覽次數:450次

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產品簡介

whatman 沃特曼 4057-200 DEAE纖維素填料 DE-52 2kg
性質及用途: 預溶脹微粒, 為中等堿性陰離子交換劑,柱層析用于吸附劑,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等各種生物高分子。

詳細介紹

whatman 沃特曼 4057-200 DEAE纖維素填料 DE-52 2kg

 

性狀: 干燥細結晶或纖維狀

基質 高度交聯纖維素

配基 二乙基氨基乙基

配基密度 40μmol /ml

吸附載量 180mg HSA/ml

填料的顆粒大小 50μm

zui大流速 300cm/h

pH范圍 3-10,在位清洗時pH范圍可到2-11

化學穩定性 各種緩沖液及鹽,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M鹽酸胍,乙醇,異丙醇等

物理穩定性 0.1M中性緩沖液中,120℃30min

保存溫度 +4--30℃

纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體

whatman 沃特曼 4057-200 DEAE纖維素填料 DE-52 2kg

 

該法提取IgG簡便,既可小量提取,也可大量制備。

1.批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g,置于1000ml燒杯中,先以蒸餾水漂浮除去細顆粒,再經酸堿處理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡。將水分抽干,或用布氏濾斗(內放兩層濾紙)過濾,收集濕纖維素,以降低其離子強度。按1ml血清加濕重5g DE52,經過充分攪拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此處理一次,即獲得較純的IgG。該法提取IgG簡便,既可小量提取,也可大量制備。

2.Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)

【材料和試劑】

(1)DE52纖維素。

(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。

(3)待純化標本: 雜交瘤腹水或培養上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。

(4)1.5×50cm 層析柱;透析袋;紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。

【操作步驟】

(1)DE52纖維素的處理:DE52經酸、堿處理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。

(2)裝柱: 將層析柱固定于滴定架上,柱底墊一圓形尼龍紗,出口接一細塑料管并關閉出水。將浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高時,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松開出水口螺旋夾,控制流速1~2ml/min,同時連續加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后,柱面放一圓形濾紙片。

(3)平衡: 松開出水口螺旋夾,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速為15滴/min,待流出液與洗脫液之pH值達到*時,停止平衡。

(4)待提取樣品的準備:將蛋白裝入透析袋里,置4℃冰箱,對0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析過夜。

(5)加樣、洗脫與收集:用吸管吸去柱面液體,以毛細吸管沿柱壁加入樣品,樣品體積相當于柱床體積的1%~2%,蛋白濃度為50~70mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進入柱床內,并用少量洗脫液清洗柱壁;待液體進入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脫,控制流速為14~16滴/min。分部收集器收集,紫外監測,或人工收集,以紫外分光光度計分別測定每管280nm OD值,描繪洗脫液峰。

(6)濃縮: 將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并,裝入透析袋,以PEG濃縮至所需體積。

3.Tris-PO4離子交換層析法

該法在上述方法的基礎上稍加改良,即通過梯度洗脫,可用于血清中IgG和IgM的提取。

【材料和試劑】

(1)DE52纖維素。

(2)待純化標本: 雜交瘤腹水或培養上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。

(3)1.5×50cm 層析柱;透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。

(4)梯度洗脫液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。

【操作步驟】

(1)蛋白標本對0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。

(2)DE52裝柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。

(3)加樣,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脫,紫外監測直至洗脫液280nm OD回到基線。這一步驟可除去血清中其他蛋白。

(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脫,這一步驟可用于純化血清IgG和IgM。

(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫,總量收集250ml;重復步驟(5)。

(6)根據280nm峰值合并蛋白峰,透析濃縮和保存同上。

用過的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收。再用蒸餾水洗至中性,加入0.02%疊氮鈉于4℃保存備用。纖維素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52


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