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BD 556547 Annexin V FITC 細胞凋亡檢測試劑盒I

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更新時間:2017-05-23 10:25:44瀏覽次數:2912次

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產品簡介

BD 556547 Annexin V FITC 細胞凋亡檢測試劑盒I
“產品名稱:Annexin V FITC APOPTOSIS Detection KIT I 100TST
品牌及貨號:BD Pharmingen 556547
關鍵詞:Annexin V FITC APOPTOSIS Detection KIT I

詳細介紹

BD 556547 Annexin V FITC 細胞凋亡檢測試劑盒I?

一、概述 
       在正常細胞中,磷脂酰*只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡zui早期,膜磷脂酰*(PS)由脂膜內側翻向外側,這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA的片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。AnnexinV是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰*有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰*與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

 

BD 556547 Annexin V FITC 細胞凋亡檢測試劑盒I?

二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的組份:            

Product code Description
556547         Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a      Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b      Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c      Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

            
三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的操作步驟 :
        貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。

 

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四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的保存:

4℃保存,兩個月內可保持穩定;避免反復凍融。

五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的注意事項 :
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的zui后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,zui短可在上機前5分鐘再加入PI染色。

BD 556547    AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒 100T 

關鍵詞:顯微鏡

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