在TSZ elisa試劑盒操作過程中總是會呈現或大或小的問題,比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。今日上海莼試為咱們帶來了一些實驗經驗總結,教您這樣操作ELISA試劑盒實驗不會失利。
1.有的包被原可能不是蛋白,關于*和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被,我把辦法簡明的列出如下:
2.親和素*:先親和素先包被載體,參加*化的DNA,這種包被辦法均勻、結實,已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。
3.應留心以下原理:由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間 的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易 吸附到固相載體外表。包被液的挑選,一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于實驗的需求,包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。 具體的實驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下可不能夠應用到自己實驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有 pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
4.在洗板時會有必定誤差,人為因素很大(當然有條件的用洗板機在外),洗的不*或串了孔,對如斯敏捷的ELISA體系但是不小的影響。由于 聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,為到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖,鏟除殘留在板孔中游離的物質,以及非特異性地吸附的干 擾物質,在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。洗刷板:能夠說在ELISA操作中,洗刷是zui首要的紐帶技能。
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