小鼠淋巴細胞因子ELISA 試劑盒

包裝規格：48T/96T

檢測方法：酶聯免疫

檢測標本：血清、血漿、細胞培養液等

本試劑盒僅供體外研究使用!

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。
• 洗板機（可調注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
• 超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。
• 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
• 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
• 37℃恒溫箱。
• 低溫離心機。
• 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
• 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
• 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
• 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.  各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

8.  每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。

9.  配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

10.  實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作，并在使用前充分預熱。

11.  手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

小鼠淋巴細胞因子ELISA 試劑盒樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據存放，時間做相應溫度調整，但應避免反復凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

• 標準品的稀釋：（本試劑系統提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執行：

• 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
• 加樣:(詳細操作流程請客服索要說明書）
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

結果判斷

1.  每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸） 

2. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。

3．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。*使用專業制作曲線軟件進行分析計算結果。

4．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9200。
2.  靈敏度：zui小可檢測濃度達，1.05ng/ml。
3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

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ELISA加樣時的防錯小經驗：

（1）用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區分。

（2）可以利用液面反光與沒有加的孔加以區別

（3）在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產生小氣泡，也可以加以區分

實驗zui常見問題解答：

問：做間接Elisa法測試小鼠血清中的IgE抗體，設空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數為5千、1萬、10萬、20萬不等，用的是*標記的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過氧化物酶。可是結果除了空白對照孔沒有顏色外，其余各孔全有顏色，而且OD值都相差不大，為什么？

回答：可能原因如下：

（1） 水質被金屬離子等污染；防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。

（2） 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留；防止辦法洗滌液應注滿微孔，充分洗滌。

（3） 移液頭重復使用，未洗凈或消毒不*； 防止辦法移液頭一次性使用。

（4） 酶標板靈敏度過高。

（5） 一抗顯色時間的控制等等，關于ELISA的每一步都要注意才行。

 ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

      實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。

技術流程

問題解答：

若實驗效果不好，請及時對顯色結果拍照，保留所用板條及未使用試劑，并妥善保存，然后我公司為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：

題解答