小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)ELISA   試劑盒

包裝規格：48T/96T

檢測方法：酶聯免疫

檢測標本：血清、血漿、細胞培養液等

本試劑盒僅供體外研究使用!

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。
• 洗板機（可調注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
• 超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。
• 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
• 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
• 37℃恒溫箱。
• 低溫離心機。
• 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
• 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
• 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
• 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.  各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

8.  每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。

9.  配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

10.  實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作，并在使用前充分預熱。

11.  手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)ELISA   試劑盒樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據存放，時間做相應溫度調整，但應避免反復凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

• 標準品的稀釋：（本試劑系統提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執行：

• 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
• 加樣:(詳細操作流程請客服索要說明書）
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

結果判斷

1.  每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸） 

2. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。

3．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。*使用專業制作曲線軟件進行分析計算結果。

4．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9200。
2.  靈敏度：zui小可檢測濃度達，1.05ng/ml。
3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

8. 檢測范圍： 480ng/ml -3.9ng/ml

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小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)ELISA   試劑盒 ELISA加樣時的防錯小經驗：

（1）用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區分。

（2）可以利用液面反光與沒有加的孔加以區別

（3）在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產生小氣泡，也可以加以區分

實驗zui常見問題解答：

問：做間接Elisa法測試小鼠血清中的IgE抗體，設空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數為5千、1萬、10萬、20萬不等，用的是*標記的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過氧化物酶。可是結果除了空白對照孔沒有顏色外，其余各孔全有顏色，而且OD值都相差不大，為什么？

回答：可能原因如下：

（1） 水質被金屬離子等污染；防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。

（2） 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留；防止辦法洗滌液應注滿微孔，充分洗滌。

（3） 移液頭重復使用，未洗凈或消毒不*； 防止辦法移液頭一次性使用。

（4） 酶標板靈敏度過高。

（5） 一抗顯色時間的控制等等，關于ELISA的每一步都要注意才行。

小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)ELISA   試劑盒問題解答：

若實驗效果不好，請及時對顯色結果拍照，保留所用板條及未使用試劑，并妥善保存，然后我公司為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：

題解答