人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒產品基本介紹:
產品類型:ELISA試劑盒
:135 64515386
大小:96T/48t
種類:鼠
目標名稱:甲狀腺激素反應(SPOT14同源,大鼠)
縮寫:THRSP
蛋白質生物過程:合成/代謝
蛋白質生物過程:脂肪合成和脂肪代謝
蛋白質生物過程:脂質的合成
檢測時間:1-5H
樣品體積:50-100ul
檢測wavelengt:450nm處
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒說明書:
原理:
此法采用定量夾心酶聯免疫技術。抗體具體為THRSP已經被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和任何的THRSP目前的固定抗體的約束。*共軛的抗體特異性THRSP除去任何未結合的物質后,加入到孔中。抗*蛋白共軛的辣根過氧化物酶(HRP)的洗滌后,加入到孔中。經過洗滌,以除去任何未結合的抗*蛋白的酶試劑,底物溶液加入到孔中,并顯色成比例的量的初始步驟中的約束的THRSP。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。
Specificty:
此法具有靈敏度高,特異性好,檢測大鼠THRSP。無顯著的交叉反應性或大鼠的T??HRSP和類似物之間的干擾進行了觀察。
精度:
批內精密度(內檢測精度):CV%<8%
三種已知濃度的樣品進行了測試20次在一個平板上進行評估。
間精密度(精密檢測間):CV%<10%
已知的三個樣本20檢測到的濃度進行了測試評估。
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒樣品采集和存儲:
血清:使用血清分離管(SST)和全血標本在室溫下兩小時或4℃過夜℃,然后離心15分鐘,在1000×g下。刪除上清即可檢測,或分裝和店內樣品在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環。
等離子:采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血劑。在2-8°C在30分鐘內收集離心15分鐘,1000×G。即可檢測,或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環。
檢測程序:
在使用前,將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據建議,所有樣品和標準來測定一式兩份。
1。準備好所有試劑,工作標準和樣品在前面的章節中。
2。請確定井數的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥劑,密封保鮮袋,將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時,在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體,不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體(1倍)。蓋上一個新的膠粘帶。孵育1小時,在37℃下(*抗體(1X)可能會出現混濁。預熱至室溫,輕輕混勻,直到出現均勻解決方案。)
6。吸液的各孔和洗滌,共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈,每孔填充洗滌緩沖液(200μL)使用噴瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,靜置2分鐘,*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后,清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一個新的粘接劑條。溫育1小時,在37℃下
8。重復的愿望/洗滌過??程中,在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘,在37℃下避光
10。一站式解決方案,每孔加入底物,輕輕晃動酶標板,以確保充分混合。
11。在5分鐘內,設置至450nm,使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正,設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數減去讀數。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經修正讀數直接,可能會比較高,不太準確。
計算結果:
建議使用專業的軟“曲線專家1.3”的標準曲線,這可以從我們的下載。
平均每個標準和樣品的重復讀數和平均減去零標準的光學密度。
標準曲線,通過減少使用能產生四參數邏輯(4-PL)的曲線擬合的計算機軟件的數據。作為一種替代方法,建立標準曲線,對在y-軸的濃度通過繪制在x-軸為每個標準的平均吸光度,并繪制一個通過在曲線圖上的點的擬合曲線。該數據可以通過繪制的的THRSP濃度與日志的OD的日志,并可以通過回歸分析確定的擬合線線性化。此過程會產生足夠的,但不太精確的適合的數據。
如果已稀釋的樣品,從標準曲線上讀出的濃度必須乘以稀釋因子。
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一、服務
我們可以根據您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
二、ELISA檢測概述
ELISA(酶聯接免疫吸附反應分析)是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。
三、技術流程
雙抗體夾心法(檢測未知抗原) | 間接法(檢測未知抗體) |
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。 | 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 |
四、客戶須知
1、液體類標本(細胞培養上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等);
2、樣本保存:請盡早檢測,2-8℃保存一天;需更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集樣本,請將樣本及時分裝標號后,置-20℃或-70℃保存;
3、請提前告訴我們:您樣本的種屬、樣本數量、待測指標及其他特殊要求。
五、報告內容及標準
1、ELISA標準曲線;
2、詳細的實驗步驟;
3、完整的實驗報告(試劑耗材,實驗方法,實驗結果及結果說明);
4、實驗進行階段,我公司客服人員會及時向您匯報實驗進程。