產(chǎn)品名稱：人PCIII (III型前膠原)elisa試劑盒

：135 64515386    

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

檢測方法： ELISA酶聯(lián)免疫法

說 明 書：隨貨發(fā)送，也可直接在線銷售索取

測試種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

試劑盒保存及有效期：2-8℃,避光保存:6個月。

產(chǎn)品產(chǎn)地：進口/國產(chǎn)

產(chǎn)品庫存：現(xiàn)貨

品牌：自主研發(fā)/進口原裝

產(chǎn)品價格：*，洽談！

試劑盒使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.

產(chǎn)品價格：*,洽談！

 簡介酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linkedimmunosorbent assay簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗原（抗體），再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測抗體（抗原）-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產(chǎn)生成正比。
 
二、ELISA試劑盒組成
1. 微孔板 (固相抗體)     96 well
2. 標(biāo)記抗體 (30倍濃縮，HRP標(biāo)記抗體)  0.4 ml
3. 標(biāo)準(zhǔn)品    0.5 ml × 2
4. EIA緩沖液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)   30 ml
5. 標(biāo)記抗體稀釋液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 12 ml
6. 顯色液 (TMB底物液) 15 ml
7. 終止液 (1N硫酸) 12 ml
8. 洗滌緩沖濃縮液 (40倍濃縮，0.05% Tween-20的磷酸緩沖液)    50 ml

三、ELISA法的應(yīng)用
1.免疫酶染色各種細胞內(nèi)成分的定位。
2.研究抗酶抗體的合成。
3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4.定量檢測體液中抗原或抗體成分。
 
四、ELISA實驗要點
洗滌：洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
五、標(biāo)本的收集和保存
1.要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
2.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
4.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

六、公司現(xiàn)貨報價標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

七、ELISA操作中的洗滌
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。 
b)特別注意：設(shè)計實驗的時候要考慮實驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上面或一側(cè)或分開。同時注意甩掉洗液的動作翻轉(zhuǎn)（從正上方旋轉(zhuǎn)120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來甩液體！甩出后以直線方式補2－3次甩出液體。 
c)用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會相差很大。
d)每次拍板不要重復(fù)在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟；拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板很用力不會對蛋白有什么影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，zui后一次一定要扣干凈。
e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數(shù)。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

八、樣本處理及要求
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
九、魚熱應(yīng)激蛋白70 (HSP70) ELISA試劑盒公司現(xiàn)貨報價操作技術(shù)流程 
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加*40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
 
八、公司現(xiàn)貨報價計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

九、ELISA試劑盒檢測范圍和保存條件及有效期             
1ng/L -30ng/L
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
 
十、ELISA試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11% 
十一、ELISA試劑盒常見問題
問：比如說我偶然發(fā)現(xiàn)只加*的也出現(xiàn)淺黃色，這怎么解釋呢？
答：可能的原因：
1、洗板時有交叉感染   
2、*中本身有本底的一個較小的讀數(shù)。也是ELISA的一個局限性，免疫的很多反應(yīng)稀釋液 洗滌液發(fā)揮了很重要的作用，不加的話效果不明顯，但是加了以后有些成分可能有一部分的干擾作用。 可以比較不同的廠家的盒子 都存在這些局限性的，但不影響zui終的結(jié)果。ELISA嚴(yán)格的說就是一個半定量的方法。
問：特殊稀釋液是做什么的？
答：一般情況都不要用的，他的zui大的用途就是稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。但是,現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)稀釋好了 所以不需要用了。如果你需要更多的標(biāo)準(zhǔn)品，可以用他來稀釋。
問：ELISA試驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差，這是什么原因造成的？
答：ELISA試驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差，這是典型的由測定操作引起的問題，常見原因如下： 
a)可能原因：ELISA加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不*；
解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。
重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近；
重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性；
樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。
b)可能原因：加樣過快，孔間發(fā)生污染；
解決方法：重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性；加樣不要過快。