產品名稱：

產品規(guī)格：48T/96T

檢測方法： ELISA酶聯(lián)免疫法

說 明 書：隨貨發(fā)送，也可直接在線銷售索取

測試種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

試劑盒保存及有效期：2-8℃,避光保存:6個月。

產品產地：進口/國產

產品庫存：

品牌：自主研發(fā)/進口原裝

產品價格：*，洽談！

試劑盒使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.

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ELISA試劑盒定性定量檢測一步到位，可同時大批量完成多種屬的檢測工作，而且一天之內可以檢查幾百甚*千份標本，正規(guī)專業(yè)的我們，一定能幫您，將實驗做得更好，更精確。試驗過程中，如有任何疑問都可和我們，無論是售前、售中、售后我們都將始終如一，將優(yōu)質服務進行到底。

試劑盒組成及試劑配制

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為400 pg/ml，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制200 pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）400 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

6、 檢測溶液A：1×120 /瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋（如：10 檢測溶液A / 990檢測稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（100/孔），實際配制時應多配制  0.1-0.2ml。

7、 檢測溶液B：1×120 /瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8、 底物溶液：1×10ml/瓶。

9、 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H2SO4）。

11、覆膜：5張

12、使用說明書：1份

自備物品

1、 酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）

2、 微量加液器及吸頭，EP管

3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

標本的采集及保存

1、 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80保存，但應避免反復凍融。

2、 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于 1000g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80保存，但應避免反復凍融。

3、 其它生物標本：請1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80保    存，但應避免反復凍融。

注：以上標本均應密封保存，4保存應小于1周，-20不應超過1個月，-80不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1、 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加標準品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣 時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結果有效

性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100（臨用前配制），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。

3、 棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4、 每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。

5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液90，酶標板加上覆膜37避光顯色（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。

7、 每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物    液的加入順序相同。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。

注：

1、 試劑準備：所有試劑在使用前應平衡至室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內。*設置復孔進行實驗。

3、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài)；同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

4、 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確 配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10），以避免由于不準確稀  釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。

6、 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

7、 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

洗板方法

1、 手工洗板方法：將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；根據需要，重復此過程數次。

2、 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性

    本試劑盒可同時檢測重組或天然的大鼠sPLA2，且與其它相關蛋白無交叉反應。

計算

  各標準品 值扣除空白孔 值后作圖（七點圖），如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為縱坐標（對數坐標），值為橫坐標（對數坐標），在對數坐標紙上繪出標準曲線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如 curve expert 1.3，根據樣品值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

檢測范圍：6.25 pg/ml - 400 pg/ml，繪制標準曲線請取用以下濃度值：400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml。

zui低檢測限：1.65 pg/ml

說明

1、 只有全部使用試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關聯(lián)的，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守試劑的實驗說明才會得到很好的檢測結果。如由于實驗者的操作失誤或試劑盒保存不當導致結果不佳，不屬產品質量問題。

2、 在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的   污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。

3、 試劑盒保存：請收到試劑盒后盡快將標準品、檢測溶液A和檢測溶液B保存于-20，其余試劑短期保存請置于4，*保存則置于-20。開封后的酶標板要密封加干燥劑后保存于-20，避免潮濕。

4、 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

5、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。

6、 有效期：6個月。

7、 本操作說明適用于48T試劑盒，但48T試劑盒所有試劑減半。

關于ELISA試劑盒

特點：一、高效、靈敏、特異的抗體；
　　二、穩(wěn)定的重復性和可靠性；
　　三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
　　四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型；
　　五、節(jié)省實驗經費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L，則認為回收率為99%。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

elisa試劑盒測試要求

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的*性不是很好。

試劑盒的標準曲線zui高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。

試劑盒的標準曲線相關系數R≥0.98。

試劑盒重復性好，板內、板間變異系數均<9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結果的重復性

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚*千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大

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