小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA測定試劑盒廠家
規格:48孔(T)/96孔(T)
品牌:仁捷生物
代測服務:全程ELISA實驗技術指導,免費代做實驗(從標本收集、保存、預試驗、實驗、數據分析等全實驗過程提供完整的技術指導。)
運輸:快遞(生物干冰或冰袋運輸)2-3天。
本公司ELISA試劑盒檢測樣本齊全:(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey……)用于測定血清,血漿,組織及相關液體等樣本。
小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA測定試劑盒廠家上海仁捷生物科技有限公司“質量是企業是生命之源”,選購ELISA檢測試劑盒,優勢如下:
1)*抗體——高效、靈敏、特異
2)規范包被操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3)*的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4)適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5)可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等X
我司ELISA試劑盒樣本處理方法匯總表及計算解析:
一、液體樣本
液體樣本處理原則:所有的液體樣本,用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),如果以后碰到其他的液體樣本,也按這個方法,納入匯總表。
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、*或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
7、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動,來回輕輕顛倒數次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
二、固體樣本
固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先收集細胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。
1、組織標本:切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨;
2、細胞內蛋白樣本
許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
(1)培養的細胞
A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)組織的細胞
切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
4、*:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解*頭部,搖勻,用鑷子取出*并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
5.植物標本中相關酶或蛋白的測定:(粗提?。?br />1、新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2、加入樣品體積9倍的提取液(pH?7.4PBS緩沖液),3、請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。
三、樣本收集注意事項
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。
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計算方法示例:繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值。(如下圖所示)