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江蘇菲亞生物科技有限公司
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BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒使用說明
2019-4-30 閱讀(3268)
BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
堿性條件下，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能與Cu2+結(jié)合生成紫色絡(luò)合物，同時將Cu2+還原為Cu+。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的絡(luò)合物，562nm處有zui高的吸收值，可在540-595nm測定其吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計(jì)算待測蛋白的濃度。
BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒簡介：
對不同種類的蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小，快速靈敏，穩(wěn)定可靠，測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。而且在20-2000μg / mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒使用說明：
1. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫下24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取C液10微升稀釋至100微升，使終濃度為0.5mg/mL。原則上，蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用什么溶液稀釋。但我們強(qiáng)烈建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品及樣品。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)在20-2000μg / mL之間。建議使用倍比稀釋法；建議取4~6個不同的濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線；建議每個濃度做2~3個復(fù)孔。
4. 蛋白樣品的稀釋：將待測蛋白樣品稀釋到標(biāo)準(zhǔn)曲線所能檢測的范圍內(nèi)。在eppendorf管中對待測蛋白進(jìn)行稀釋，混勻。可用溶解蛋白的液體進(jìn)行稀釋，但我們建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液，再在每孔中分別加入已稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和蛋白樣品各20μL，建議標(biāo)準(zhǔn)品做2~3個復(fù)孔。37℃放置30分鐘。
6. 測定A562nm處的吸光度值，540-595nm之間的波長也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。
