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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產品： 轉化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍耳(PRRS)elisa kit |
公司信息
細胞活性定磷比色法定量檢測試劑盒實驗步驟
2019-1-24 閱讀(1329)
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進冰槽里融化。然后進行下列操作。
一、 樣品準備
1． 準備好 25cm2細胞培養瓶或 60mm細胞培養皿的待測培養細胞（5 X 106細胞）
2． 小心加入 xx 毫升預冷的 SBJ 清理液（試劑 A），覆蓋生長表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞
5． 加入 xx 毫升 SBJ 清理液（試劑 A），混勻細胞
6． 移入到預冷的 15 毫升錐形離心管（注意：懸浮細胞從這一步驟開始）
7． 放進 4℃臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入 xx 微升S B J 裂解液（試劑 B），充分混勻
10．轉移到預冷的 1.5 毫升離心管
11．強力渦旋震蕩 15 秒
12．置于冰槽里孵育 30 分鐘
13．放進 4℃微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM）
14．小心移取 500 微升上清液到新的預冷的 1.5 毫升離心管
15．移取 2 微升進行蛋白定量測定
16．即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作
二、細胞活性定磷比色法定量檢測試劑盒測定準備
1． 準備好待測樣品（例如細胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：樣品須澄清）
2． 設定好分光光度儀（溫度為 30℃）：波長為 660nm，并置零
3． 準備好 5 個 1.5 毫升離心管，標記為 1 至 5 號管
4． 按下表分別加入S B J 陰性液（試劑 D）和 SBJ標準液（試劑 H）到每個離心管， 混勻
5． 將 1 至 5 號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表：
管號 SBJ陰性液（試劑 D） SBJ 標準液（試劑 H） 測定體系標準磷濃度
1 0 xx 微升 20 微摩爾/升
2 xx 微升 xx 微升 15 微摩爾/升
3 xx 微升 xx 微升 10 微摩爾/升
4 xx 微升 xx 微升 5 微摩爾/升
5 xx 微升 0 0
