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HEPES緩沖液的配制和使用方法
2018-1-3 閱讀(2319)
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。
關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說法。根據(jù)用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結(jié)如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。
二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，zui后定容。
三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制
將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。
HEPES使用方法有兩種：
(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。
(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，zui終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細(xì)胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達(dá)到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了。
