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江蘇菲亞生物科技有限公司
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新生牛血清的病毒檢查方法
2017-10-18 閱讀(939)
新生牛血清從出生14小時內未進食的新生牛采血分離血清，經除菌過濾后制成。牛血清生產過程中不得任意添加其他物質成分。
新生牛血清的病毒檢查
1. 細胞培養法
（1）非血吸附病毒檢查
將新生牛血清供試品分別接種到人源（如人二倍體細胞）、猴源（如Vero細胞）以及牛腎傳代細胞三種細胞，采用的牛腎傳代細胞系應證明無牛病毒的污染。每種細胞至少接種6瓶，每瓶細胞懸液接種量不少于培養液總量的25%。于36±1℃培養21天。接種的每種細胞都應同時設立牛血清陰性對照和病毒陽性對照，陰性對照用牛血清應證明無牛病毒污染。
培養過程中可根據細胞生長情況更換細胞培養液，每次更換培養液前應觀察（肉眼/顯微鏡）有無細胞病變出現。培養到期后，陰性對照應無任何細胞病變出現，陽性對照應出現典型的細胞病變，試驗成立。供試品檢查應不出現任何細胞病變為陰性，符合要求。
（2）血吸附病毒檢查
將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附病毒檢查。用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細胞混合懸液覆蓋于細胞表面，置2~8℃分鐘，然后置20~25℃30分鐘，分別進行鏡檢，觀察紅細胞吸附情況， 供試品檢查結果均應為陰性。試驗同時應設立血吸附陽性對照。
2. 免疫熒光抗體檢查法
采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法，至少應對牛腹瀉病毒，牛腺病毒、牛細小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進行檢查，結果均應為陰性。
