透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)是使用的一類電鏡。通過發(fā)射電子束從而穿過超薄的樣品,同時與樣本相互作用,既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。其分辨率為0.1~0.2nm,放大倍數(shù)為幾萬到幾十萬倍。目前透射電鏡已經(jīng)廣泛的應(yīng)用到癌癥研究,病毒學(xué)研究,微生物學(xué),細(xì)胞學(xué)研究等生物領(lǐng)域。
動植物 組織取材流程及要求: 取材流程: 動物麻醉后,快速取出需要檢測的組織,將組織切成 1 mm 3 左右小塊,固定于 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。植物組織除麻醉外,其他操作相同。
取材要求: 1.定位準(zhǔn)確:解剖水平的準(zhǔn)確定位誤差應(yīng)≤1mm。注意各組實驗動物取材區(qū)位及方位的一致性和代表性。 2.操作迅速:組織離開活體后,以zui快的速度浸入戊二醛固定液,0.5 min 或zui多2 min。事先準(zhǔn)備好 l 1.5ml 尖頭 P EP 管里面盛滿預(yù)冷的戊二醛固定液。 3.標(biāo)本尺寸大?。航M織塊大小需要在 1 mm 3 左右,樣品太大會導(dǎo)致樣品固定不充分。(提示:把較大標(biāo)本塊修整成符合要求的顆粒時,須事先準(zhǔn)備一個蠟盤,滴入戊二醛固定液,把標(biāo)本浸在液滴中修整,確認(rèn)每個小標(biāo)本顆粒都包含需要的結(jié)構(gòu)內(nèi)容,用牙簽挑出 3~5 粒標(biāo)本,放入 l 1.5ml 尖頭 P EP 管。) 4.保持低溫環(huán)境:為降低自溶酶活性,在 4℃低溫條件下取材,容器和器械預(yù)冷;將修整好的標(biāo)本塊放入戊二醛固定液后,普通 4℃冰箱保存。細(xì)胞取材流程及要求 取材流程: 細(xì)胞直接刮下,細(xì)胞懸液離心,棄上清,PBS 清洗 2 次,離心成團(tuán),加入 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。懸浮細(xì)胞、菌液可直接視為細(xì)胞懸浮液操作。 固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到 PBS 中,后續(xù)操作一致。
取材要求: 1.確認(rèn)細(xì)胞數(shù)量充足(6cm 或 10cm 皿長滿),離心后在 ep 管中 綠豆大小; 2.新鮮配置的電鏡 2.5%戊二醛固定液,PH 值 7.3-7.4; 3.貼壁細(xì)胞用柔軟細(xì)胞劃子輕輕刮起成細(xì)胞懸液,盡量不要反復(fù)來回刮; 4.把細(xì)胞懸液置入潔凈 l 1.5ml 尖頭 P EP 管; 5.選擇合適的離心速度和時間離心,一般 1000rpm 至 3000rpm,5min 至 10min(轉(zhuǎn) 速及洗的時間請根據(jù)具體情況具體分析,比較脆弱敏感的細(xì)胞,盡量低轉(zhuǎn)速、短時間, 以細(xì)胞離心成團(tuán)為準(zhǔn)!S PBS 洗的時間過長,容易造成自噬假陽性); 6.取細(xì)胞團(tuán)塊,如致密團(tuán)結(jié)即棄上清,注入新鮮 2.5%戊二醛固定液,4℃保存;
提示: a.取離心好的細(xì)胞團(tuán)塊時,如細(xì)胞分散,可在離心管中注入約 5ul 血清后再次離心,至 EP 管底部出現(xiàn)致密細(xì)胞團(tuán)塊,即送電鏡室。 b.細(xì)胞大小不同,*離心富集速率和時間不同。提前檢索文獻(xiàn),避免反復(fù)離心損傷細(xì)胞。