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上海鈺博生物科技有限公司
閱讀:268發布時間:2017-12-25
ELISA試劑盒實驗中常見疑問及解決方法
這篇文章中就著重為我們敘述一下ELISA試劑盒實驗中常見疑問及解決方法,如有不全部,還請多指導!
1、挑選試劑
挑選質量優良的檢查試劑,嚴厲依照試劑闡明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2、加樣
也許因素:
(1) 血清或血漿標本別離欠好即進行加樣;
(2) 手藝操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內溫度較高時);
3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
(1) 標本為血清:將血液先天然寄存1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:有必要運用含抗凝劑的血液標本搜集管,采血后有必要當即倒置采血管混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢查,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
(2) 加樣后及時放入孵箱。
(3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
(4) 假如選用AT或別的全自動加樣,挑選FAME或別的后處理儀器加酶試劑。
(5) 標本較多時,請分批操作。
3、孵育
也許因素:
(1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*;
(2) 孵育時刻人為延伸,致使非特異性結合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
(1) 貼封片或加蓋;
(2) 按闡明過程嚴厲控制操作時刻。
4、洗板
也許因素:
(1) 選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。
(2) 選用半自動洗板機洗板時,洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板作用差。
(3) 反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法:
(1) 確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干;
(2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5、顯色
也許因素:
(1) 顯色劑制造后放置時刻過長或運用過期顯色劑;
(2) 加顯色劑時濺出孔外形成液體回流。
解決辦法:
(1) 顯色劑盡量在臨用前制造,堅持不期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不必;
(2) 加樣時堅持顯色劑不外流;
(3) A、B液應避免觸摸金屬器械。
6、停止
也許因素如加停止液時發生較多氣泡,致使假陽性添加。所以在加停止液時應避免發生氣泡。
7、讀板
如讀板時板底不清洗等。應確保酶標板清洗。所以在整個操作過程中確保酶標板不觸摸次氯酸;盡也許實現ELISA試劑盒檢查規范自動化,有用進步檢查質量。
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