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色譜柱的使用說明：
（1）色譜柱使用前注意事項：色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。
（2）流動相：
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDS C18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動相。
（3）樣品：
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
2、色譜柱的保存
（1）反相色譜柱每天實驗后的保養：
使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（2）長期保存色譜柱：
如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊dan化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
3、色譜柱的再生
因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
4、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點：
（1）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
（2）色譜柱頭的填料被樣品污染；
（3）色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出；
（4）流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。
解決辦法如下：
（1）如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
（2）如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
（3）如確定定是鹽結晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
（4）如果因PH值使用不當，很難恢復。
一、色譜柱的使用
反相色譜柱一般是保存在甲醇或乙腈中。使用前一定注意所使用的流動相和甲醇或乙腈能夠互溶。色譜柱在保存過程中有可能因為溶劑的揮發而干涸，所以在使用流動相分析之前應使用10—20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱。如果所使用的流動相中含有緩沖鹽，則應注意用水作為過渡，而不能直接將有機溶劑和緩沖鹽直接混合。測試結束后沖洗柱子也要注意這一點。還有一點需要注意的是不要使用純水沖洗色譜柱。對于非極性柱，比如C8和C18，由于純水不能浸潤填料表面而沖倒碳鏈，造成柱效下降。另外，分析樣品時由于純水不能浸潤填料表面形成水膜，出現樣品不保留而使分離度下降，重復性差，所以對于一般的C8和C18柱，有機溶劑的比例不應低于5%。
二、色譜柱的再生
再生過程中用來沖洗色譜柱的溶劑體積可以參照下表：
再生過程及溶劑沖洗順序可參見下表：
三、色譜柱的維護
1.盡量能夠使用預柱或保護柱保護色譜柱；
2.大多數色譜柱的PH范圍是2—8，盡量不要超過范圍使用；
3.避免流動相的組成或比例急劇變化；
4.流動相使用前必須進行過濾和脫氣處理；
5.如果使用極性或粒子性的緩沖液作流動相，實驗完畢后應將色譜柱沖洗干凈
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱體積的溶劑清洗：（正向沖洗時流速：0.5ml/min）
95%水：5%乙腈(或甲醇)
（去除緩沖鹽）
如系統沒有梯度功能中間增加5倍柱體積50%水：50%乙腈（或甲醇）沖洗步驟。
95% 乙腈（或甲醇）：5%水
zui后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。
如是Phenomenex柱子可以反沖，但流速一點要控制在0.2ml/min之內。
如還有疑問，可以發郵件給我，ydfq-0013
你問的不是C18的沖洗嗎？那個二氯甲烷是沖洗正相硅膠柱的，也就是（silica柱子的）。
一、反相柱子的再生
順次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），已腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
液相色譜HPLC保留時間漂移的故障排除
保留時間不重現有兩種不同的情況：即保留時間漂移和保留時間波動。前者是指保留時間僅沿單方向發生變化，而后者指保留時間無固定規律的波動。將此兩種情況區分開來對找到問題的原因往往很有幫助。保留時間漂移的幾種zui常見的原因如下:
一 色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相*平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長的時間來平衡色譜柱。
流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時間的漂移。應注意：水是很容易污染的流動相成分。
二 固定相穩定性
固定相的穩定性都是有限的，即使在的PH范圍內使用，固定相也會慢慢水解。例如，硅膠基質在pH4時水解穩定性。水解速度與流動相類型和配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。
經常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環境中也可以發生水解，如氨基鍵合相等。
三 色譜柱污染
保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質。污染源可以是：流動相本身，流動相容器，連接管、泵、進樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過實驗可判斷污染的來源。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分，就可能是使保留時間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉，環境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加。可以通過使用固相提取（SPE）等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響。
避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然。相比之下，找到問題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。
使用保護柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。
四 流動相組成
流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發組分的揮發及循環使用流動相等。
五 疏水坍塌
當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動相時，有時會發生分離突然喪失及被分析物質保留明顯降低或*不保留的現象，這就是疏水坍塌。此現象是由流動相不浸潤固定相表面而致。挽救的辦法實現用含大量有機組分的流動相浸潤固定相，再用高水含量的流動相進行平衡。由是色譜柱長期儲存也會發生此現象。使用內嵌極性基團的反相色譜柱或非端基封口的色譜柱也可避免發生坍塌
