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氣相色譜和液相色譜儀的區(qū)別 液相色譜使用方法

閱讀:6          發(fā)布時間:2025-1-6
【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】色譜儀是一種用來進行色譜分離分析的裝置,憑借其的分離能力以及準確度較高的分析能力,在食品安全、工業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)療制藥等領域都有較為廣泛運用,在我們生產(chǎn)生活的各種領域發(fā)揮著重要的作用。  色譜儀的種類有很多,其中氣相色譜和液相色譜是較為常見的兩種色譜技術,今天我們就氣相色譜和液相色譜的異同做個簡單的講解。  兩者的差異  1. 流動相區(qū)別  正如名字中所提及的,氣相色譜的流動相為惰性氣體,流動相與組分無親合作用力,只與固定相有相互作用;而液相色譜的流動項為液體,與組分間有親合作用。  2.色譜柱長度的區(qū)別  氣相色譜由于載氣的相對分析量較低,分子間隙大,故粘度低,流動性好,組分在氣相中流動速度快,因此可以增加柱長,以提高柱效,色譜柱長度也在幾米到幾十米不等;液相色譜的色譜柱通常在幾十到幾百毫米。  3.分析樣品的選擇  氣相色譜一般選擇相對分子質(zhì)量較小、低沸點、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定性強的樣品;液相色譜一般用于分析高沸點、難揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差、分子質(zhì)量較大的液體化合物。  4檢測限制  氣相色譜使用時需要將樣品在氣化室氣化,需要較高的檢測溫度,并且采用的是尖頭進樣針,液相色譜則不需要對樣品氣化,常溫即可檢測,同時采用的是平頭進樣針。  兩者的共同點  氣相色譜和液相色譜的基本試驗方法相似,本質(zhì)上,都是利用“相似相溶”試驗方法,利用色譜柱進行分離。同時在質(zhì)譜聯(lián)用領域,兩者都可以成為質(zhì)譜聯(lián)用儀很好的分離項使用。 有關液相色譜儀的系統(tǒng)組成介紹

液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相;

被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù);

在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別;

被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀;

數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);

下面將分別敘述其各自的組成與特點。

進樣系統(tǒng)

一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。

這對提高分析樣品的重復性是有益的。

輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。

高壓泵的一般壓強為47~44X10Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當高壓流動相通過層析柱時;

可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度;

這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變;

包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。

這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。

分離系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管);

內(nèi)徑為2~5mm,由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成;

住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構成)。

固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構成;

它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點;

加之其表面經(jīng)過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣);

氣相色譜和液相色譜儀的區(qū)別 液相色譜使用方法(圖1)

或者用化學法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。

因此,這類固定相對結構不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應。

基質(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。

根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。

這也進一步證明基質(zhì)粒度小,會提高分辨率的道理。

再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C;

通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。


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