試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被雞甲狀腺素（T4）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞甲狀腺素（T4）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
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