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牛凝血酶提高PCR的效率和特異性

時(shí)間:2019/4/18閱讀:1178
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成功的PCR都是相似的,而不成功的PCR卻有各種各樣的原因。于是,人們都希望找到普遍適用的PCR增強(qiáng)劑。研究人員發(fā)現(xiàn),牛凝血酶(BT)在防止引物二聚體形成和增強(qiáng)PCR產(chǎn)物形成上極為有效。

PCR是許多領(lǐng)域的核心技術(shù)之一,比如疾病診斷和法醫(yī)鑒定。盡管這種技術(shù)被廣泛使用,但有時(shí)還是困難重重,特別是在擴(kuò)增低拷貝、富含GC或復(fù)雜的樣品時(shí)。隨著新技術(shù)的發(fā)展,PCR也面臨新的問(wèn)題。例如,在適體(aptamer)的選擇過(guò)程中觀察到PCR偏向,而納米材料的使用雖然能大幅提高PCR的特異性或靈敏度,但也可能抑制PCR。

為了解決這些問(wèn)題,人們開(kāi)始采用各種PCR添加劑和增強(qiáng)劑來(lái)提高PCR的產(chǎn)量、特異性和一致性。凝血酶是一種*的絲氨酸蛋白酶,可將可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不可溶的纖維蛋白,并催化其他許多與凝血相關(guān)的反應(yīng)。在這項(xiàng)研究中,研究人員發(fā)現(xiàn)牛凝血酶作為一種通用的PCR增強(qiáng)劑相當(dāng)有效。

研究人員通過(guò)多個(gè)種類(lèi)的樣品來(lái)證明牛凝血酶的PCR增強(qiáng)效果,包括低拷貝的合成單鏈DNA(ssDNA)、合成的ssDNA庫(kù)、人類(lèi)基因組DNA和乙型肝炎病毒基因組DNA。他們發(fā)現(xiàn),在牛凝血酶存在時(shí),引物二聚體條帶全部消失,而PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量明顯增加。同時(shí),牛凝血酶也能提高復(fù)雜樣品的PCR效率,比如存在高濃度的無(wú)關(guān)DNA分子時(shí)。

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