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原代細胞的培養與維持

時間:2017/12/13閱讀:8551
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()原代細胞培養  
1、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)  
    凡經消化液處理實體組織來源的細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L培養基可用Eagle(MEM)DNEM培養,小牛血清濃度為10%80%,有條件的應在37 5% CO2的培養箱中培養,在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮。若原代貼壁細胞不是用于長期培養,只是用于分離繁殖或測定病毒之用,其細胞濃度可以加大,盡量貼成厚層以利病毒的效價提高和測定結果(如空斑)更加明顯、準確,待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,此時的pH若有明顯變化,應將原代細胞換液,即倒去舊液,換入新鮮的培養基,以便除去衰老、死亡的細胞和陳舊的培養基,使貼壁細胞能獲得充足的營養。  
若用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,可有少量的肌樣纖維間質細胞或基質細胞開始貼壁生長,為了利于該貼壁細胞充分貼壁和生長,此時換液應將細胞懸液經低速離心后,按半量換液方式棄去舊液加入新液,然后再將細胞懸液放入原瓶中繼續培養,經反復幾次換液后,貼壁肌樣細胞逐漸形成網狀,此時換液可將原懸浮細胞和培養基移入另一新瓶,然后分別補加新鮮培養基(也按半量換液方式分別對半加入新液)繼續培養,原瓶的貼壁細胞逐漸長成單層,而新瓶中又會出現二次貼壁細胞,經幾次換液也會逐漸長成單層,在此類細胞培養時,培養基中往往需加入少量的維生素D3bFGF、地塞米松、小牛血清(濃度要在20%以上),以利細胞貼壁生長。  
2、懸浮細胞的培養  
   凡來自外周血、胸腹水、脾臟、淋巴結、骨髓的淋巴細胞、造血干細胞以及白血病細胞,在原代培養時要盡量去除紅細胞。若作用于試驗的短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行培養,細胞濃度可在58×109/L范圍內,然后進行分瓶試驗。若要將淋巴細胞及白血病細胞進行長期培養,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長,待細胞開始增殖甚至結成小團塊,培養基中pH變酸,說明細胞生長繁殖良好,一般每隔3天需半量換液一次(換液時盡量使細胞不丟失),待細胞增殖加快,濃度明顯增加,pH發生明顯變化時,此時可考慮傳代。但千萬不能急于傳代,一定要待細胞密度較高時才能進行,以防傳代失敗。 

 

 

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