ELISA是一種免疫測(cè)定。免疫測(cè)定(immunoassay，IA)是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。在臨床檢驗(yàn)中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。

1、抗原

    抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗原進(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫。在免疫測(cè)定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原(hapten)。例如某些激素、藥物等。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇(antigenic determinant)，或稱為表位(epitope)。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇。

2、抗體

（1）抗體的結(jié)構(gòu)

    抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個(gè)輕鏈(L)和兩個(gè)重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤模?/span>κ(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈。

（2）抗體的產(chǎn)生

    機(jī)體受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。含有抗體的血清稱為抗血清(antiserum)。每一系B細(xì)胞只產(chǎn)生針對(duì)某一抗原決定簇的抗體。如將多種抗原或含有多個(gè)抗原決定簇的抗原注入機(jī)體，則將由多系的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的多種抗體，這些抗體均存在于免疫血清中。免疫測(cè)定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞可在體外與繁殖力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。將單個(gè)雜交瘤細(xì)胞分離，在體內(nèi)或體外培養(yǎng)而分泌的抗體單克隆抗體(monoclonal antibody，McAb或Mab)。單克隆抗體僅針對(duì)一種抗原決定簇，具有很高的特異性。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。將免疫的脾細(xì)胞(含產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞)與小鼠腫瘤細(xì)胞融合，分離雜交瘤細(xì)胞，接種于小鼠腹腔，產(chǎn)生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。

（3）抗原抗體反應(yīng)

    可逆性 抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab。.抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以平衡常數(shù)K表示：K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]。Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān)。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果。

    特異性 抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。例如乙肝病毒中的表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)和核心抗體(HBcAg)，雖來(lái)源于同一病毒，但僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合，而不與另外兩種抗體反應(yīng)。抗原抗體反應(yīng)的這種特異性使免疫測(cè)定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物(例如血清)中測(cè)定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。

3、酶免疫測(cè)定

    酶免疫測(cè)定(enzyme immunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進(jìn)行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離而直接測(cè)定標(biāo)記物。例如在某種條件下，抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物中的酶失去其對(duì)底物作用的活力，因而測(cè)出的酶活力直接反映游離的酶標(biāo)記物。