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Anti-TGM3抗體,轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體

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更新時(shí)間：2017-11-15 09:03:55瀏覽次數(shù)：226次

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上海研盟生物科技有限公司

經(jīng)營(yíng)模式：生產(chǎn)廠家

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

“Anti-TGM3抗體,轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體"2A抗體規(guī)格0.1ml、0.2ml、1ml，抗體產(chǎn)品有效期一年，質(zhì)保三個(gè)月，質(zhì)保期內(nèi)出現(xiàn)任何質(zhì)量問題或是出不了實(shí)驗(yàn)結(jié)果均可免費(fèi)退換：

詳細(xì)介紹

上海研盟生物科技有限公司Anti-TGM3抗體,轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體*，主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中。說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接我司在線客服索取?？头?/p>

簡(jiǎn)單介紹：

中文名稱：轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體

英文名稱：Anti-TGM3

產(chǎn)品編號(hào)：byk-1911R

產(chǎn)品別名：Transglutaminase 3; E polypeptide protein glutamine gamma glutamyltransferase; MGC126249; MGC126250; Protein glutamine gamma glutamyltransferase E 27 kDa catalytic chain; Protein glutamine gamma glutamyltransferase E 50 kDa noncatalytic chain; Protein glutamine gamma glutamyltransferase E; TG(E); TGase E; TGE; TGM 3; TGM3; Transglutaminase E; Transglutaminase3; TransglutaminaseE; TGM3_HUMAN.

產(chǎn)品用途：科研實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品價(jià)格：請(qǐng)報(bào)價(jià)

說明書：請(qǐng)?zhí)砑涌头苯铀魅?/p>

抗體來源：該指標(biāo)有兩種產(chǎn)品，一種是兔來源抗體，一種是鼠來源抗體

克隆類型：兔來源為多克隆抗體，鼠來源單克隆抗體

交叉反應(yīng)：請(qǐng)索取說明書查看

性狀：Lyophilized or Liquid

濃度：1mg/1ml

亞型:IgG

純化方法: affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol

保存條件: Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Anti-TGM3抗體,轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體產(chǎn)品介紹：Transglutaminases are enzymes that catalyze the crosslinking of proteins by epsilon gamma glutamyl lysine isopeptide bonds. While the primary structure of transglutaminases is not conserved, they all have the same amino acid sequence at their active sites and their activity is calcium dependent. Transglutaminase 3 consists of two polypeptide chains activated from a single precursor protein by proteolysis. Transglutaminase 3 is involved the later stages of cell envelope formation in the epidermis and hair follicle.

Western Blotting 具體實(shí)驗(yàn)步驟
Western，也稱Western blot、Western blotting、Western 印跡，是用抗體檢測(cè)蛋白的重要方法之一。
Western可以參考如下步驟進(jìn)行操作：
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白，例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后，為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量*，需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
（1）、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制，也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
（2）、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制，也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。
（3）、上樣與電泳
冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時(shí)通常*在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對(duì)于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見，也可以采用整個(gè)SDS-PAGE過程恒壓的方式，通常把電壓設(shè)置在100V，然后設(shè)定定時(shí)時(shí)間為90－120分鐘。設(shè)置定時(shí)可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況，預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實(shí)驗(yàn)中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜（二氟化樹脂膜膜孔徑：0.45um)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請(qǐng)參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng)，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越短。
在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時(shí)，通常會(huì)有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象，把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對(duì)膜進(jìn)行染色，以觀察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液對(duì)完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色，以觀察蛋白的殘留情況。
4、封閉(Blocking)
轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡洗滌液，加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動(dòng),室溫封閉60分鐘。對(duì)于一些背景較高的抗體，可以在4℃ 封閉過夜。
5、一抗孵育(Primary antibody incubation)
參考一抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳，可以在4℃緩慢搖動(dòng)孵育過夜?；厥找豢?。加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。
6、二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
參考二抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western二抗稀釋液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。回收二抗，加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。
7、蛋白檢測(cè)(Detection of proteins)
參考相關(guān)說明書，使用BeyoECL, Western 熒光檢測(cè)試劑等ECL類試劑來檢測(cè)蛋白。
洗片時(shí)可以使用X光片自動(dòng)洗片機(jī)。如果沒有自動(dòng)洗片機(jī)，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。
8、膜的重復(fù)利用(Membrane recovery)
如果蛋白樣品非常寶貴，可以使用Western一抗二抗去除液處理蛋白膜，以重復(fù)利用蛋白膜。

相關(guān)產(chǎn)品：

TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體
TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2)  金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體
TIMP-3(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3)  金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體
TIMP-4(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-4)  金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體
TLR1/GD2/CD281(Toll-like receptor 1)  Toll樣受體1抗體
TLR2/CD282 (Toll-like receptor 2)  Toll樣受體2抗體
TLR3 (Toll-like receptor 3)  Toll樣受體3抗體
TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4)  Toll樣受體4抗體
TLR5/CD285 (Toll-like receptor 5)  Toll樣受體5抗體
TM（Thrombomodulin)  血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體
GDNFRβ（glial cellline-derived neurotrophic factor,GD-NF）   膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體β抗體
Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus  腱糖蛋白-C(固生蛋白)抗體(C端)
Tn-C(Tenascin C)  固生蛋白/細(xì)胞粘合素抗體
TNF-α (Human Tumor Necrosis Factor-α )(mouse monoclonal)  鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體
TNF-α(Tumor Necrosis Factor-α)  腫瘤壞死因子-α抗體
TNFSF4/CD252(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4)  腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體
OX40/CD134/TNFBYK4(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4)   CD134抗體
TNF-β(Tumor Necrosis Factor-β)  腫瘤壞死因子-β抗體
TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1)   腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體
TNFSF14/LIGHT/CD258  腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體
TP53（tumor protein p53； Li-Fraumeni syndrome)  抗腫瘤P53抗體
TNFSF18/GITR Ligand(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18)  腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體
HVEM/TNFBYK14(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14)  腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體
*mt（Topoisomerase (DNA) I, mitochondrial)  線粒體DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗體