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Anti-Thioster-containing protein 1抗體,按蚊硫酯包含蛋白-1抗體

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更新時間：2017-11-15 09:03:55瀏覽次數(shù)：215次

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上海研盟生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：9950條

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產(chǎn)品簡介

“Anti-Thioster-containing protein 1抗體,按蚊硫酯包含蛋白-1抗體"2A抗體規(guī)格0.1ml、0.2ml、1ml，抗體產(chǎn)品有效期一年，質(zhì)保三個月，質(zhì)保期內(nèi)出現(xiàn)任何質(zhì)量問題或是出不了實驗結(jié)果均可免費退換：

詳細介紹

上海研盟生物科技有限公司Anti-Thioster-containing protein 1抗體,按蚊硫酯包含蛋白-1抗體*，主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細胞術(shù)等實驗中。說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接我司在線客服索取?？头?/p>

簡單介紹：

中文名稱：按蚊硫酯包含蛋白-1抗體

英文名稱：Anti-Thioster-containing protein 1

產(chǎn)品編號：byk-0632R

產(chǎn)品別名：TEP1.

產(chǎn)品用途：科研實驗

產(chǎn)品價格：請報價

說明書：請?zhí)砑涌头苯铀魅?/p>

抗體來源：該指標(biāo)有兩種產(chǎn)品，一種是兔來源抗體，一種是鼠來源抗體

克隆類型：兔來源為多克隆抗體，鼠來源單克隆抗體

交叉反應(yīng)：請索取說明書查看

性狀：Lyophilized or Liquid

濃度：1mg/1ml

亞型:IgG

純化方法: affinity purified by Protein A

儲存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol

保存條件: Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Anti-Thioster-containing protein 1抗體,按蚊硫酯包含蛋白-1抗體產(chǎn)品介紹：No Data Available.

Western Blotting 具體實驗步驟
Western，也稱Western blot、Western blotting、Western 印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。
Western可以參考如下步驟進行操作：
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白，例如細胞核蛋白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關(guān)文獻提取這些亞細胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提。
收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量*，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
（1）、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
（2）、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻資料配制，也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。
（3）、上樣與電泳
冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時通常*在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見，也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式，通常把電壓設(shè)置在100V，然后設(shè)定定時時間為90－120分鐘。設(shè)置定時可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況，預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜（二氟化樹脂膜膜孔徑：0.45um)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V，轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時間越長，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。
在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時，通常會有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象，把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對膜進行染色，以觀察實際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍快速染色液對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進行染色，以觀察蛋白的殘留情況。
4、封閉(Blocking)
轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動,室溫封閉60分鐘。對于一些背景較高的抗體，可以在4℃ 封閉過夜。
5、一抗孵育(Primary antibody incubation)
參考一抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。
用微型臺式真空泵吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以在4℃緩慢搖動孵育過夜。回收一抗。加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
6、二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
參考二抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western二抗稀釋液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。回收二抗，加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
7、蛋白檢測(Detection of proteins)
參考相關(guān)說明書，使用BeyoECL, Western 熒光檢測試劑等ECL類試劑來檢測蛋白。
洗片時可以使用X光片自動洗片機。如果沒有自動洗片機，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進行手工洗片。
8、膜的重復(fù)利用(Membrane recovery)
如果蛋白樣品非常寶貴，可以使用Western一抗二抗去除液處理蛋白膜，以重復(fù)利用蛋白膜。

相關(guān)產(chǎn)品：

TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體
TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2)  金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體
TIMP-3(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3)  金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體
TIMP-4(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-4)  金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體
TLR1/GD2/CD281(Toll-like receptor 1)  Toll樣受體1抗體
TLR2/CD282 (Toll-like receptor 2)  Toll樣受體2抗體
TLR3 (Toll-like receptor 3)  Toll樣受體3抗體
TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4)  Toll樣受體4抗體
TLR5/CD285 (Toll-like receptor 5)  Toll樣受體5抗體
TM（Thrombomodulin)  血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體
GDNFRβ（glial cellline-derived neurotrophic factor,GD-NF）   膠質(zhì)細胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體β抗體
Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus  腱糖蛋白-C(固生蛋白)抗體(C端)
Tn-C(Tenascin C)  固生蛋白/細胞粘合素抗體
TNF-α (Human Tumor Necrosis Factor-α )(mouse monoclonal)  鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體
TNF-α(Tumor Necrosis Factor-α)  腫瘤壞死因子-α抗體
TNFSF4/CD252(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4)  腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體
OX40/CD134/TNFBYK4(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4)   CD134抗體
TNF-β(Tumor Necrosis Factor-β)  腫瘤壞死因子-β抗體
TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1)   腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體
TNFSF14/LIGHT/CD258  腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體
TP53（tumor protein p53； Li-Fraumeni syndrome)  抗腫瘤P53抗體
TNFSF18/GITR Ligand(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18)  腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體
HVEM/TNFBYK14(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14)  腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體
*mt（Topoisomerase (DNA) I, mitochondrial)  線粒體DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗體