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南京金益柏生物科技有限公司
南京金益柏wb細胞收集實驗方法,針對WB,南京金益柏特意詳細列出了具體實驗的方法以及步驟,下面就是實驗的過程:
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WB收集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細胞。如要裂解細胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),細胞培養皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白則加如1ul抑制磷酸化蛋白降解抑制劑,加入細胞裂解液后用移液器將細胞吹勻,冰上靜置5min,離心4℃ 12500g/5min,吸取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解細胞,將細胞置于-80℃冰箱。
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普通PCR收集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細胞。將細胞置于-20℃冰箱。
qRT-PCR收集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,使用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保留底層細胞。加入1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(注意:本實驗需使用耗材和試劑都為無RNA酶,PBS必須高壓,離心管和槍頭必須無酶)
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