細(xì)胞：MADB106細(xì)胞
中文名稱：大鼠乳腺腺癌細(xì)胞系
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
揭示活細(xì)胞反應(yīng)過(guò)程以及細(xì)胞如何響應(yīng)化學(xué)信號(hào)的機(jī)制將有助于改進(jìn)當(dāng)下針對(duì)已產(chǎn)生抗性的多種癌癥和其他細(xì)胞紊亂疾病的治療方法。
研究揭示了Ras蛋白家族活性機(jī)制。這一蛋白家族是細(xì)胞生物信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的最重要組成部分之一，也是癌癥發(fā)展主要驅(qū)動(dòng)因素。
活細(xì)胞的細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)起始于位于細(xì)胞表面的受體蛋白，由這些蛋白檢測(cè)并與環(huán)境中的信號(hào)作用，之后受體將接受到的信號(hào)轉(zhuǎn)化為化學(xué)網(wǎng)絡(luò)。盡管胞內(nèi)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)執(zhí)行的邏輯運(yùn)算類似計(jì)算機(jī)微處理器，然而又有不同之處，即同樣的輸入會(huì)產(chǎn)生不一樣的結(jié)果。
Ras是膜錨定蛋白家族一員，其活性的激活是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中關(guān)鍵步驟，其控制胞內(nèi)細(xì)胞增殖、分化和存活。
已知Ras基因的變異是發(fā)現(xiàn)的與人類癌癥相關(guān)的變異，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)約1/3的癌癥發(fā)生了Ras的錯(cuò)誤激活現(xiàn)象。同時(shí)Ras信號(hào)的不正常也被認(rèn)為是其他疾病例如糖尿病、免疫相關(guān)疾病和炎癥紊亂等的致病因子。
理解Ras信號(hào)作用的阻力在于如何通過(guò)SOS交換因子激活膜錨定蛋白R(shí)as的重要作用，而SOS活性又通過(guò)該蛋白和膜的相互作用調(diào)節(jié)構(gòu)象。
這一相互關(guān)系的認(rèn)識(shí)當(dāng)前是通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)研究推斷出來(lái)而非直接觀察的結(jié)果。為更好理解通過(guò)SOS調(diào)控Ras活性的機(jī)制，研究需要在膜上直接觀察每個(gè)SOS分析與Ras的作用。然后，從膜環(huán)境來(lái)研究歷來(lái)一直是個(gè)挑戰(zhàn)。
