細胞:CFPAC-1細胞
中文名稱:人胰腺導管癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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哺乳細胞的細胞核是一個高度復雜的自組裝結構,染色質是其主要成分。
已有大量證據表明基因表達調控過程經常伴隨著染色質結構的動態變化,這可能是基因表達調控的一個更高級的層面。
以轉錄工廠(transcription factory)模型為例,該模型最早在1993年提出,基于電鏡和免疫熒光的數據發現大量RNA Pol-II集合的位點,多個基因被招募到這些轉錄工廠共轉錄。
然而到目前為止這個模型還存在很大爭議,最主要的原因是研究手段的限制。之前的數據主要依賴于電鏡和熒光顯微鏡,電鏡雖然分辨率高,但沒有動態信息;
熒光顯微鏡則沒有足夠的分辨率。實現對轉錄工廠RNA Pol II cluster的動態定量觀測對其機理的研究有重要意義。
通過發展和應用貝葉斯超分辨率顯微技術,在活細胞的細胞核內原位觀察到了單個轉錄工廠的組裝和解聚的動態過程,并且測量了活細胞內轉錄工廠的數目和大小隨時間以及細胞環境的影響。
揭示了轉錄工廠產生和消失的異質性,支持了轉錄工廠產生的on-demand模型,證明了轉錄工廠在pre-elongation phase招募Pol II 分子。這一成像分析方法也可以應用到其他納米尺度的活細胞核內動態觀測研究中。