細胞:B16細胞
中文名稱: 小鼠黑色素瘤細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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乳癌中的APOBEC3B表達與細胞增殖密切相關。發現一種缺失多樣性與免疫激活有關。研究揭示了“T細胞受體”是識別人體內正常細胞和病毒的關鍵。
乳癌和其他癌癥的基因組測序研究,已經確定了APOBEC3B (A3B,AID/APOBEC胞苷脫氨酶家族成員)內源性增變基因活性所引起的突變模式。
A3B是一種細胞脫氨酶,在許多腫瘤中是超表達的,被認為是癌癥相關突變的一個重要原因,但是,引起A3B上調的因素仍不明確。此外,還存在一種共同的生殖細胞缺失多樣性(A3Bdel),因此,很大一部分的人群并不表達A3B蛋白。
為了檢測A3B在乳腺癌中的表達及其結構性缺失的原因和后果,分析了兩大臨床注釋的乳腺癌數據集——The Cancer Genome Atlas (TCGA) and the molecular Taxonomy of Breast Cancer International Consortium (METABRIC),試圖解決這些觀察結果所提出的生物學和臨床問題,主要目的是解決基因表達和多態性關聯之間的不一致性。
研究確認,A3B表達與侵襲性臨床病理特征及預后不良有關,并表明在乳腺癌和16種其他實體瘤的15種腫瘤中,A3B表達與增殖特征高度相關(有絲分裂和細胞周期相關基因的表達)。
A3B缺失的純合子a3bdel所引起的乳腺癌患者的這些特征并沒有不同,從而表明A3B表達是增殖增加的一種反映而不是直接原因。利用基因集合富集分析(GSEA),在a3bdel乳腺癌中檢測到了一種免疫激活模式,似乎與a3bdel攜帶者中出現的突變相關。
這些結果為A3B超表達及其預后影響提供了一個解釋,支持將這個增變基因作為一個癌癥生物標志物或藥物靶點。盡管a3bdel的免疫特征還需要更多的研究,但這些研究結果仍然推薦將a3bdel多態性作為腫瘤免疫治療的一個潛在預測因子。