細胞:NRK-52E細胞
中文名稱:大鼠腎小管上皮細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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干細胞培育環境影響干細胞分化
在紫外光照射下,這種凝膠會軟化,這使得研究能夠改變底物的硬度,且無需分離及轉移細胞至新環境。發現細胞在硬底物上培養一天然后恢復至軟表面培養后,RUNX2會“失活”從細胞核重定位到細胞質。
(人MDA-MB-435S細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
然而如果細胞在硬底物上培養10天再轉換為軟底物,之后的10天時間里RUNX2仍在細胞核中活化。當檢測YAP激活時看到了相似的結果。在硬底物上度過的時間越長,細胞于軟表面培養時YAP活化的時間也相應延長。
(人M14細胞 來源:通派細胞庫 人黑色素瘤細胞)
研究結果還具有實用意義。如果一種體外培養過程能夠無意中誘導細胞某方面活化……它們有可能不會像研究人員所猜測的那樣運轉。這無疑增加了我們關于體外應該如何培養干細胞的認識。
(人M4A4細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
RUNX2、YAP以及其他的一些改變與細胞在硬材料上度過的時間相關,但這樣的關聯未必確定證實了這些改變的原因。