細胞名稱：L Wnt-3A 小鼠皮下結締組織細胞
組織來源：C3H/An小鼠皮下結締組織
培養條件：DMEM +0.4mg/mL G-418 +10% FBS
形 態：貼壁；成纖維細胞樣
背 景：L-M(TK-) 細胞用Wnt-3A表達載體轉染并在含G418的培養基中篩選穩轉株。Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白。Wnt基因控制胚胎發過程中的許多模式形成和生長事件。這些細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它們是目前生產Wnt-3A條件培養基的來源。由于這種條件培養基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養基的實驗有必要用其來源細胞株L cells (ATCC CRL-2648)作對照。
L Wnt-3A(小鼠皮下結締組織細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。
formazan結晶的生成量僅與活L Wnt-3A(小鼠皮下結締組織細胞)數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.L Wnt-3A(小鼠皮下結締組織細胞)培養：同一般培養條件，培養3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。
3.呈色：培養3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制L Wnt-3A(小鼠皮下結締組織細胞)生長曲線。
