ELISA檢測噬菌體抗體與目的抗原的親和力
[ELISA檢測噬菌體抗體與目的抗原的親和力] 實驗試劑 1. 0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)2. 1％BSA3. HRP標記的抗M13噬菌體多抗 4. 2mol/L H2SO4 實驗設備 1. 酶標板 2. 酶標儀 實驗步驟 1. 將抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀釋至10μg/ml；2. 對于要檢測的每個克隆，至少包被2個孔，每孔用200μl稀釋抗原。同時包被陰性對照抗原。此外，包被陽性 [目的抗原 親和力 噬菌體抗體 ELISA 抗原 噬菌體 包被]
實驗試劑
1. 0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)
2. 1％BSA
3. HRP標記的抗M13噬菌體多抗
4. 2mol/L H2SO4
實驗設備
1. 酶標板
2. 酶標儀
實驗步驟
1. 將抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀釋至10μg/ml；
2. 對于要檢測的每個克隆，至少包被2個孔，每孔用200μl稀釋抗原。同時包被陰性對照抗原。此外，包被陽性對照抗原，陽性對照抗原用anti-M13抗體；
3. 室溫包被1～2h，于4℃過夜包被，甩掉孔中液體，倒置于紙巾上空干。
4. 每孔中用至少200μl 1％BSA封閉，37℃1h。去掉液體后空干。
5. 將重組噬菌體事先用等體積的封閉液于室溫下封閉15min～30min，以封閉各種蛋白質之間的非特異性結合位點。
以M13噬菌體作為陽性對照噬菌體，也按上述步驟操作。
6. 在每個包被抗原孔中，加入稀釋的重組噬菌體懸液200μl，37℃ 1～2h。在包被了陽性對照抗原的孔中，加入200μl陽性對照噬菌體。
7. 去掉孔中液體，倒置于紙巾上。將板浸入PBS/0.5％ Tween20(PBST)中，振蕩趕走氣泡，將板取出。重復洗滌５遍。
8. 將板倒置于紙巾上，去掉所有液體。
9. 將HRP酶標的Anti-M13抗體用封閉緩沖液稀釋至合適濃度。
10. 在每孔中加入200μl HRP/Anti-M13稀釋液。
11. 37℃溫育1h。按前述方法洗滌6次。
12. 每21ml 1×ABTS底物溶液中加入36μl 30％ H2O2。在每孔中加入200μl。
13. 置室溫20～60min，直至出現適中的顏色反應。加入2mol/L H2SO4終止反應。
14. 于415nm波長下用酶標儀讀出光吸收值。良好的數據中，噬菌體抗體與篩選抗原的吸收值應當比陰性對照抗原的吸收值高2～3倍。
