ELISA實驗方法匯總
ELISA實驗步驟：
1、試劑準備：根據選擇的試劑盒準備好相關試劑。
2、樣品準備：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織標本等。
3、試劑的配置
4、抗體包被：Coating Buffer: 稀釋成Coating Buffer （1×），根據產品說明書稀釋抗體，每孔加入100ul預稀釋的抗體，4°C過夜孵育（16-18h）。
5、使用前，將所有試劑充分混勻，避免產生泡沫。
6、根據實驗孔（空白和標準品）數量，確定所需的板條數目。樣品（含標準品）和空白都應做復孔。
7、加樣：100 μL/well 加入稀釋后的 Cytokine standard 至標準品孔，100 μL/well 加入樣
品至樣品孔，100 μL/well 加 Dilution buffer R (1×)入空白對照孔。
8、加檢測抗體：根據產品說明書加入 Biotinylated antibody 。 混勻后蓋上封板膜，室溫孵育。
9、洗板：扣去孔內液體，300 μL/well 加入 1×washing buffer；停留 1 分鐘后棄去孔內液體。重復 3 次，每一次在濾紙上扣干。
10、加酶：根據產品說明書加入稀釋好的酶，孵育。
11、洗板：重復步驟 5 。
12、顯色：100 μL/well 加入 TMB，室溫（18-25℃）避光孵育5-30分鐘之間，根據孔內顏色的深淺（深藍色）來判定終止反應。 通常顯色 10-20 分鐘可以達到很好的效果。
13、終止反應：迅速 100 μL/well 加入 Stop solution 終止反應。
14、讀板：終止后 10 分鐘內，用檢測波長（measurement wavelength）450 nm 讀值。推薦用雙波長即檢測波長（measurement wavelength）450 nm 、參考波長或校正波長（reference wavelength ）610-630 nm 同時讀板，測量結果會更準確。
