試劑盒的常見背景問(wèn)題解析
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關(guān)閉液廉價(jià)、安穩(wěn)，在去掉洗刷過(guò)程中的一些非特異上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，由于很簡(jiǎn)單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要添加關(guān)閉液。請(qǐng)勿運(yùn)用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會(huì)下降特異，發(fā)作假陰性。另一個(gè)挑選是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，后者可幫忙洗刷過(guò)程中的關(guān)閉。
關(guān)閉更要害
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中潛在的位點(diǎn)。這就下降了可發(fā)作信號(hào)的抗體非特異的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也期望抗體只與意圖蛋白吧。假如您的布景過(guò)高，置疑關(guān)閉不充分，那么您能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)刻。
假如您一向被布景疑問(wèn)所困惑，那么或許您該花些時(shí)刻來(lái)優(yōu)化關(guān)閉液。這也許需求時(shí)刻，但也是值得的。目前主要有兩種類型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)要素，包含微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢查試劑發(fā)作相互作用。
洗刷很主要
洗刷過(guò)程看似很無(wú)聊，本來(lái)很主要，由于假如未的資料（如非特異的抗體或檢查試劑）殘留在微孔板中，那么它會(huì)添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻撓非特異反應(yīng)。假如布景過(guò)高，而您置疑洗刷不行時(shí)，能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
抗體濃度須優(yōu)化
咱們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作過(guò)程，但是假如試劑稍有不同，則也許需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體會(huì)添加布景。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
檢查試劑要適當(dāng)
ELISA試驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。但是，即使是平鋪直敘的洗刷和關(guān)閉，假如做得不太好，也有也許毀了全部試驗(yàn)。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，咱們是否能取得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會(huì)影響您對(duì)成果的判別。怎么下降ELISA的布景，下面有一些tips。
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