污水處理設備 污泥處理設備 水處理過濾器 軟化水設備/除鹽設備 純凈水設備 消毒設備|加藥設備 供水/儲水/集水/排水/輔助 水處理膜 過濾器濾芯 水處理濾料 水處理劑 水處理填料 其它水處理設備
上海澤葉生物科技有限公司
上海澤葉生物科技有限公司
暫無信息 |
閱讀：1887發布時間：2017-7-7
流式細胞儀的原理簡介
流式細胞分析（flow cytometry，FCM）即流式細胞術，是用流式細胞儀測量液相中懸浮細胞或微粒的一種現代分析技術。它凝結眾多不同學術背景、不同科研領域科學家的心血。現代流式細胞術更是由于結合單克隆抗體技術、定量細胞化學技術和定量熒光細胞化學，使其在生物學、臨床醫學、藥物學、材料學等眾多領域研究中的應用有更加突飛猛進的發展。
一、流式細胞儀的原理
流式細胞儀主要由4部分組成：液流系統、光學系統、電子系統、分析系統。（如圖1）它只能檢測懸浮的單細胞或微粒的信號。
圖1 流式細胞儀組成結構 圖2 流動室和液流驅動系統
一般是將待測細胞或微粒進行熒光染色后制成懸液標本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細胞或微粒的緩沖液（又稱鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測細胞或微粒流成一定角度，使鞘液包繞著細胞或微粒高速流動（如圖2），形成一個圓形的流束（即鞘流），待測細胞在鞘流的包裹下單行排列，依次通過流式細胞儀的檢測區域，經激發光激發后產生熒光信號。流式細胞儀通常以激光作為激發光源，經過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下產生散射光和激發熒光（如圖3）。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進行檢測，稱為前向散射（forward scatter，FSC），這種信號基本上反映細胞體積的大小；90°散射光又稱側向散射（side scatter，SSC），是指與激光束-液流平面垂直的散射光，其信號強度可反映細胞部分結構的信息。熒光信號的接收方向與激光束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號。這些熒光信號的強度代表所測細胞膜表面抗原的強度或其細胞內、核內物質的濃度，經光電倍增管接收后可轉換為電信號，再通過模/數轉換器，將連續的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號。
計算機采集所測量到的各種信號進行計算處理，將分析結果顯示在計算機屏幕上，也可以打印出來，還可以數據文件的形式存儲在硬盤上，以備日后的查詢或進一步分析。檢測數據的顯示視測量參數的不同而有多種形式可供選擇——單參數數據以直方圖的形式表達；對于雙參數或多參數數據，既可以單獨顯示每個參數的直方圖，也可以選擇二維散點圖、等高線圖或三維的立體視圖等。
圖3 光學系統 圖4 分選系統
流式細胞儀還可以對分析中的目的細胞進行分選提取，它通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴嘴上安裝有超高頻壓電晶體，可以產生高頻振蕩，使液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就包含在液滴之中。將這些液滴充上正或負電荷，當帶電液滴通過電場，在電場的作用下發生偏轉，然后落入相應的收集器之中，從而實現細胞分選（如圖4）。
二、流式細胞儀的測量對象
1、大小：懸浮在溶液中的相互離散的顆粒，范圍為0.2μm – 300μm。
2、類型：
細胞類型：1）高等真核細胞；2）酵母；3）細菌；4）多細胞的聚集體，如胰島等。
非生命顆粒：細胞核、染色體、其他細胞器以及乳化微球等。
三、能夠檢測的細胞屬性、組分（應用）
1、不需要染色
大小，胞漿顆粒度，細胞自發熒光，色素，細胞計數等。
2、需染色或標記
1）細胞膜：流動性，通透性，膜電位
2）細胞內離子：H+（可檢測pH值），Na+，K+，Ca2+（結合的和自由的）
3）核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色質結構等。
4）總蛋白質
5）蛋白質分子間相互作用
6）抗原
7）細胞骨架成分
8）受體
環保在線 設計制作，未經允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼