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小鼠信號轉導分子(Smad1)ELISA試劑盒

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更新時間:2017-02-17 14:12:08瀏覽次數:420次

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小鼠信號轉導分子(Smad1)ELISA試劑盒組織樣本的處理:

用預冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應9mLPBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。*在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

關于小鼠信號轉導分子(Smad1)ELISA試劑盒的固相載體原理:

一、良好的ELISA板應該是吸附機能好,空缺值低。
二、為比較不同固相在某一ELISA測定中的優劣,可應用如下的試驗:用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,將它們進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預定的ELISA操縱步驟進行測定,然后比較結果。可作ELISA中載體的材料良多,zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經磨砂處理后吸附面積大大增加。
三、與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個讀數與全部讀數的均數之差,應小于10%。其長處是表面積*,反應在懸液中進行,其速率與液相反應近似。
在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中動彈淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。ELISA試劑盒常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后,分別測每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應后用磁鐵的吸引進行分離,洗滌利便,試劑盒一般均配以特殊儀器。
四、為便于作少量標本的檢測,有制成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架后,大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別,各種產品的質量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其機能。

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