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單酶反應檢測
利用單酶與底物反應,然后用各種方法檢測出反應前后物質的變化情況,從而確定底物的量。這是zui簡單的酶法檢測技術。以*脫羧酶為例,L-*脫羧酶專一地催化L-*脫羧生成γ-氨基丁酸和二氧化碳,生成的二氧化碳可以用氣體檢測法測定。該酶已廣泛地用于L-*的定量分析,可使用游離酶、固定化酶或酶電極。檢測二氧化碳可以用二氧化碳電極等。利用脲酶專一地催化尿素水解生成氨和二氧化碳的特性,通過氣體檢測或者使用氨電極、二氧化碳電極等,測出氨或二氧化碳的量,就可確定尿素的量。此外,可用于單酶反應檢測的還有葡萄糖氧化酶、*氧化酶、熒光素酶等。通過單酶催化反應進行物質檢測,具有簡便、快捷、靈敏、準確的特點,是酶法檢測中zui常用的技術,具有廣泛的應用前景。
多酶偶聯反應檢測
多酶偶聯反應檢測是利用兩種或兩種以上的酶的聯合作用,使底物通過兩步或多步反應,轉化為易于檢測的產物,從而測定被測物質的量。多酶偶聯反應檢測已有不少成功應用的例子。例如,通過葡萄糖氧化酶與過氧化物酶偶聯可以檢測葡萄糖的含量,使用時先將葡萄糖氧化酶、過氧化物酶與還原型鄰聯甲苯胺一起用明膠固定在濾紙條上制成酶試紙。測試時將酶試紙與樣品溶液接觸,在一定的時間內試紙即顯色,從顏色的深淺判定樣品液中葡萄糖的含量。還可利用β-半乳糖苷酶與葡萄糖氧化酶偶聯反應檢測乳糖的含量,已糖激酶與葡萄糖氧化酶偶聯反應可以用于測定ATP的含量。
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