試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人性別決定區Y框蛋白9(SOX9)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。

操作步驟

1、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

6、溫育：操作同3。

7、洗滌：操作同5。

8、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

9、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

10、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。