抗血清純化的目的是盡量除去抗血清中與目的抗體不相關的成分，以防止抗體外的其他血清成分對試驗結果產生影響。因此只能根據不同目的的要求，從抗血清中除去容易干擾的有關成分，或提取相應的免疫球蛋白。

    江蘇菲亞生物的科研人員通過不斷的實驗研究總結出抗血清純化的方法主要有粗提法和精制法兩個過程。粗提法主要常用硫酸銨鹽析法，精制法分非特異性和特異性兩種類型。非特異性方法如葡聚糖凝膠過濾法、離子交換層析法，其方法均系基于蛋白質分子的物理性質。特異性方法如免疫吸附法，其方法基于抗原抗體的特異性反應。

一、鹽析法

    蛋白質在不同濃度的鹽溶液中相對溶解度不同，血清γ球蛋白在一定濃度鹽溶液中易于沉淀，而白蛋白則不易沉淀，據此可將二者分離。

?主要試劑與器材

1.飽和硫酸銨溶液  取500ml蒸餾水加熱至70～80℃，將400g硫酸銨溶于其中，攪拌20min，冷卻。待硫酸銨結晶沉于瓶底，其上清即為飽和硫酸銨。在使用前用28%氨水調pH7.0。
2.兔血清(含抗體)。

3.透析袋、離心機等。

?操作方法

用55%飽和硫酸銨提取血清中β、γ球蛋白

⑴血清1份加生理鹽水1份混勻,然后逐滴加入飽和硫酸銨2份中,邊加邊攪拌,防止形成團塊降低沉淀物的特異性.混勻后靜置30min或置4℃冰箱過夜。

⑵低溫高速10 000/min離心10min，將上清液(含白蛋白)棄去，取沉淀物(含球蛋白)溶于少量生理鹽水中。

用33%飽和硫酸銨提取γ球蛋白

將上述提取物生理鹽水溶液2份加1份飽和硫酸銨。然后再10 000/min離心，其余操作同上。

3.按同樣方法用33%飽和硫酸銨再提取1次。

4.將提取物裝入透析袋，在生理鹽水中透析，以除去其中所含的硫酸銨。放-20℃冰箱保存。

?結果判斷

用雙向免疫擴散法和免疫電泳法檢測抗體活性、效價和純度。

二、凝膠過濾法

?實驗原理

    利用具有分子篩效應的多孔網狀凝膠做為介質，可分離提純分子量不同的大分子物質。在凝膠過濾過程中，分子量大的物質因不能進入凝膠網孔而沿凝膠顆粒間空隙先流出凝膠柱外；分子量小的物質因能進入凝膠網孔而受阻滯，流速緩慢而zui后流出柱外，這樣就能將分子量不同的物質分離。

?主要試劑與器材

1.待提純樣品。

2.Sephadex G-200。

3.2.5×100mm層析柱。

4.洗脫液  0.01mol/L pH7.2～7.4PBS(含0.14mol/L NaCl)。

5.751紫外分光光度計。

?操作方法

1.處理凝膠  將Sephadex G-200用蒸餾水竟充分膨脹后進行浮選。

2.裝柱  在層析柱底部鋪加一層尼龍紗，然后將洗脫液和凝膠粒子沿插入柱底的玻璃棒緩緩傾注于層析柱內。

3.加樣  在凝膠柱表面再加一層尼龍紗，沿管壁緩緩加入樣品，所加樣品體積不超過凝膠柱的10%。

4.洗脫  洗脫液洗脫，流速20ml/h。待樣品洗脫下來(用20%磺基水楊酸檢測)即用試管分段收集。

5.檢測  在紫外分光光度計上測定各管樣品的A280nm值。

?結果判斷

    以A280nm值為縱軸，收集管次序為橫軸，繪出各洗脫峰，并分別收集各峰的洗脫液，再分別進行蛋白質定量與性質和純度的鑒定。用已知標準抗體，采用雙向瓊脂擴散試驗、免疫電泳法鑒定蛋白質性質和純度。

三、離子交換層析法

?實驗原理

離子交換層析是從血清包括抗血清中分離純化IgG的重要方法。它是利用帶電離子的纖維素(如DEAE纖維素)，吸附帶相反電荷的蛋白質，又因各種蛋白質的等電點不盡相同，在一定pH條件下，所帶電荷量不等，與纖維素結合的能力有別。當用pH7.4磷酸緩沖液(PB)洗脫時，人血清蛋白中IgG所帶電荷zui少，與纖維素結合zui差，故zui先被洗脫下來，從而可達到分離純化目的。

?主要試劑與器材

1.蒸餾水、0.5mol/L NaOH、0.01mol/L pH7.4 PBS、20%三氯醋酸。

2.混合正常人血清、DEAE纖維素。

3.層析柱、燒杯、pH試紙。

?操作方法

1.用蒸餾水浸泡適量DEAE纖維素過夜，除去飄浮物，再用0.5mol/L NaOH浸泡30min，反復用蒸餾水洗，可用2 000r/min離心或布氏漏斗抽濾分離，直到洗至約pH7.4，用0.01mol/L pH7.4 PBS再洗一次后裝柱。

2.用相同的PBS平衡至pH7.4，當柱上端的PB液凹面與纖維素相切時，加入一定量的血清，待血清滲入柱內與柱面相切時，立即沿管壁加少量洗脫液至形成1cm液層后，用0.01mol/L PBS洗脫，控制流速為1ml/min。

3.分管收集,每管吸取少量洗脫液，加20%三氯醋酸測蛋白，合并、保留蛋白含量較高的洗脫液。

4.將含IgG的洗脫液裝入透析袋內，用蔗糖或大分子聚乙二醇包埋過夜，水份析出，袋內IgG被濃縮。IgG可短期保存于4℃冰箱中備用。

?結果判斷

    用單向免疫擴散試驗測定濃縮液IgG含量，用抗人全血清作免疫電泳測定純度，如純化成功，應只在IgG部位出現沉淀線。

    為了提高實驗的準確性,江蘇晶美的科研人員將堅持不懈地努力,為廣大實驗研究人員提供更好的實驗方法,更好的血清產品。