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上海懋康生物科技有限公司
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農桿菌化學感受態細胞 表達分析

參  考  價:288 - 1228
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    MF2469-1000UL

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

1000ul 288元 1000支可售

5000ul 1228元 1000支可售

更新時間:2024-08-09 15:52:26瀏覽次數:451次

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級別 超純、高純
農桿菌化學感受態細胞 表達分析 GV3101菌株的背景為C58型,核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。

GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell

農桿菌化學感受態細胞

 


產品標簽:

GV3101(pSoup-p19) 菌株;農桿菌感受態細胞;Rifampicin(Rif) 利fu平;Kanamycin(kan)卡那mei素;EHA105;LBA4404;GV3101;AGL1;植物轉基因研究;

 

產品訂購:更大包裝或產品技術問題,請來電/在線咨詢,

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell

農桿菌化學感受態細胞

MF2469-1000UL

10×100μl

288

MF2469-5000UL

50×100μl

1228

 

產品描述:

GV3101菌株的背景為C58型,核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti質粒攜帶篩選標簽Gent,賦予GV3101菌株慶大mei素抗性。在GV3101菌株中轉入help質粒:pSoup-p19,即得到GV3101(pSoup-p19)菌株,可協助pGreen,62SK,pGs2系列質粒在農桿菌內復制,同時賦予該菌株四環素(Tet)抗性。另外,來源于番茄叢矮病毒的p19蛋白,能抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應,提高異源基因轉錄子的穩定性,進而改善異源蛋白的表達。本菌株適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。

我司(懋康生物)提供的GV3101(pSoup-p19)化學感受態細胞經特殊工藝制作,基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-p19-tetR),經pGs2質粒(卡那mei素抗性)檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

 

產品組分:

組分編號

組分名稱

貨號(規格)

MF2469-1000UL

MF2469-5000UL

MF2469-A

GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2469-B

pGs2 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl

 

保存與運輸條件:

保存:-80℃保存,一年有效。  

運輸:干冰運輸。

 

注意事項

1) 感受態細胞應保存在-80℃,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態細胞的轉化效率。

2) 整個轉化操作,嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。

3) 加入質粒的體積不應大于感受態體積的1/10。質粒不純或存在乙醇等有機物污染,會導致轉化效率急劇下降。質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

4) 為確保最高轉化效率,整個操作過程應盡量輕柔,并保持低溫。

5) 轉化高濃度的質粒可相應減少最終涂板用量。

6) 平板上克隆密度過大時,由于營養不足,克隆生長變慢,菌落變小。為獲得大菌落,應減少質粒用量。

7) 利fu平濃度應≤25μg/ml,過高濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。

8) 培養基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質粒丟失,但鏈mei素不利于農桿菌的轉基因操作,一般培養農桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素,因Ti質粒丟失的概率極低(基本可以忽略)。

9) GV3101(pSoup-p19)感受態細胞雖具有四環素抗性,但在轉入目標質粒涂板篩選陽性克隆時,只需加入目標質粒抗性的抗生素,不用加四環素。

10) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

1) 取-80℃保存的感受態細胞于室溫或手心片刻待其部分融化,達到冰水混合狀態時插入冰浴中使其完quan融化。

2) 往100μl感受態細胞懸液中加入0.01~1μg(體積不大于10μl)質粒DNA(注意:轉化效率較高,第一次使用前建議做預實驗確定適宜的質粒量),用手撥da管底使其混勻,依次于冰上靜置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。

3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3h。

4) 6,000rpm離心1min,留取100μl左右上清,之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上,用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min,待液體被吸收后,倒置平板,28℃培養2-3天。

【注意】:當平板只含50μg/ml卡那mei素時,28℃培養48h即可;當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時,需28℃培養60h;若使用的平板含50μg/ml利fu平,需在28℃培養72-90h。


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產品編號

產品名稱

規格

MF2301-1000UL

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10×100μl

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10×100μl

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10×100μl

MF2304-1000UL

GV3101 Chemically Competent Cell農桿菌化學感受態細胞

10×100μl

MF2305-1000UL

AGL1 Chemically Competent Cell農桿菌化學感受態細胞

10×100μl

MF2467-1000UL

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10×100μl

MF2469-1000UL

GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell農桿菌化學感受態細胞

10×100μl

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10×100μl

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10×100μl

MF2475-1000UL

AGL1(pSoup) Chemically Competent Cell農桿菌化學感受態細胞

10×100μl

MF3732-2UG

pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表達載體

2μg

MF3733-2UG

pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表達載體

2μg

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade利fu平

1g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素

10g

MS0020-25G

Tetracycline Hydrochloride, USP Grade鹽suan四環素

25g

MS0023-25G

Streptomycin Sulfate, USP Grade硫suan鏈mei素

25g

MX7401-500G

Agar, Gel Strength>1200 g/cm2瓊脂粉(植物組培級)

500g

MS0006-30ML

Plant Preservative Mixture (PPM)植物組培抗菌劑

30ml

 

附表1固體和液體LB培養基配方

組分Component

LB(液體)/升

LB(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

10g

10g

酵母提取物Yeast extract

5g

5g

氯化鈉NaCl

10g

10g

1N NaOH

調整pH至7.0

調整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g


附表2固體和液體YEB培養基配方

組分Component

YEB(液體)/升

YEB(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

5g

5g

酵母提取物Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏Beef Extract

5g

5g

蔗糖Sucrose

5g

5g

七水硫suan鎂MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

調整pH至7.0

調整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g


附表3常見農桿菌對抗生素敏感性總表

農桿菌菌株

羧芐(carb)

鏈mei素(strep)

利fu平(rif)

慶大mei素(gent)

卡那mei素(kan)

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S

AGL1

R

S

R

S

S

【備注】:S代表敏感,R代表抗性。

 

 


 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

農桿菌化學感受態細胞 表達分析農桿菌化學感受態細胞 表達分析

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