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上海懋康生物科技有限公司
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當前位置:上海懋康生物科技有限公司>>細胞生物學>>細胞增殖與凋亡>> MX3230-20TCaspase-2活性檢測試劑盒 細胞增殖

Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞增殖

參  考  價:930
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    MX3230-20T

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

20t 930元 12件可售

更新時間:2024-04-18 15:49:57瀏覽次數:694次

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級別 超純、高純
Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞增殖(Cysteine-requiring Aspartate Proteases)是一個高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識別底物中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發揮著非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達,通過自發蛋白分解機制或經其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工處理的方式被活化

Caspase-2 Activity Assay Kit (Fluorometric)

Caspase-2活性檢測試劑盒(熒光法)



產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

Caspase-2活性檢測試劑盒(熒光法)

MX3230-20T

20T

930

Caspase-2活性檢測試劑盒(熒光法)

MX3230-100T

100T

2980


產品描述

Caspases(Cysteine-requiring Aspartate Proteases)是一個高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識別底物中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發揮著非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達,通過自發蛋白分解機制或經其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工處理的方式被活化。人caspases可細分為三大功能組:細胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡啟動(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡執行(caspase-3,-6和-7)。

Caspase-2(Caspase 2),也稱為Nedd2、ICH-1,含核定位所依賴的長前肽結構域的一類caspase。一旦凋亡通路被激活,caspase酶原在Asp316位上被切割生成一個14kDa片段和一個32kDa的前肽結構域/大亞基。接下來在Asp152和Asp330被切割,進一步生成18kDa大亞基和12kDa小片段。Caspase-2是應對基因毒性應激或有絲分裂障礙的核凋亡反應物。一旦招募生成含p53誘導死亡結構域蛋白-PIDD的復合物,caspase 2被激活。因此,Caspase-2被認為是核啟動caspase,并且在下游的凋亡途徑中需要激活caspase-9和caspase-3。

Caspase-2活性檢測試劑盒(熒光法)(Caspase-2 Activity Assay Kit, Fluorometric or Caspase-2 Fluorometric Assay Kit)以偶聯上發色基團AFC的caspase-2序列特異性的多肽為底物。當底物被caspase-2剪切后,發色基團被釋放出來,進而用熒光酶標儀來測定其熒光強度(激發波長=485nm,發射波長=535nm)。通過計算RFU凋亡誘導組/RFU陰性對照組的比值來確定凋亡誘導組caspase-2的活化程度。

本品適用于培養細胞以及新鮮組織的caspase-2活性檢測。


產品包裝

編號

組分名稱

保存方法

貨號(規格)

MX3230-20T

MX3230-100T

MX3230-A

Lysis Buffer 裂解緩沖液

2-8℃

5ml

20ml

MX3230-B

2× Reaction Buffer 2×反應緩沖液

2-8℃

2ml

10ml

MX3230-C

Caspase-2 Substrate Caspase-2底物

-20避光

6μl

30μl

MX3230-D

0.1M DTT

-20避光

60μl

250μl


保存與運輸方法

保存:-20℃保存,1年有效。開盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-2 Substrate和0.1M DTT需要避光凍存。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1) Caspase-2 Substrate需避光保存和使用。

2) 某些凋亡誘導劑誘導的凋亡可能通過caspase-2非依賴的方式進行,此種情況使用本品檢測的caspase-2活性無明顯變化,則,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。

3) 起始細胞數量需達3~5×106個或新鮮組織量達50~100mg,以保證達到測定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-2的活性與細胞裂解后的蛋白含量有關,如測定的RFU值偏低,可通過適當延長反應時間來操作。但如果測定的RFU值依然不高,則要通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。

4) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

1需要的其他試劑和材料

儀器:低溫高速離心機、熒光酶標儀、微量移液器、玻璃勻漿器(組織樣本)

耗材:1.5ml微量離心管、白色或黑色(不透明、平底)的96孔酶標板

試劑:PBS、蛋白定量試劑(比如:Bradford法蛋白濃度測定試劑盒)、ddH2O


2試劑準備

2.1 Lysis Buffer(含DTT

于實驗前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。

2.2 Reaction Buffer(含DTT

于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的反應工作液。

2.3 Caspase-2 Substrate工作液

將Caspase-2 Substrate從冰箱內取出,置于室溫(或25℃水?。┦蛊涑浞秩诨退匐x心使其沉至管底。于使用前,按照19.5μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl Caspase-2 Substrate的比例準備足量的Caspase-2 Substrate工作液。


3樣本準備

3.1 細胞裂解

a)用合適方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性對照組(不加誘導劑),收集3~5×106個細胞。

b)PBS洗滌細胞2次(2000rpm,離心5min),盡量吸盡PBS上清。

c)往離心的沉淀細胞中加入100μl預冷的Lysis Buffer(含DTT,吹打混勻。

d)置冰上裂解20~60min,其間渦旋振蕩3~4次,每次10s;或凍融2~3次。

e)4℃,10,000rpm離心1min。

f)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質)轉移到新的EP管內,置于冰上待用。

g)取少量上清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白濃度。

3.2 組織裂解

a)取50~100mg組織置于培養皿內,用手術剪剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入150~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT,用玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作。

b)將組織勻漿液轉移到1.5ml預冷的離心管,10,000rpm,4℃離心5min。

c)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質)轉移到新的EP管內,置于冰上待用。

d)取少量上清(1~2μl),用常規方法(Bradford法)測定蛋白濃度。

4Caspase-2活性檢測

 

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